Stanovení kyseliny lipoové v lidské plazmě metodou HPLC

Mgr. Soňa Sechovcová

Diplomová práce

The determination of lipoic acid in human plasma using HPLC

Anotace:

Kyselina lipoová je dithiolová sloučenina, která se používá v klinické medicíně a experimentálních modelech jako antioxidant. Zachovává si své antioxidační vlastnosti v obou jejich formách, oxidované i redukované, a reguluje recyklaci ostatních oxidovaných antioxidantů. Je stále více zřejmé, že kyselina lipoová může být velmi důležitá jako léčebný prostředek při diabetu. U diabetických pacientů užívajících kyselinu lipoovou buď intravenózně nebo perorálně bylo pozorováno blahodárné působení na regulaci hladiny glukosy. Důvodem je interakce kyseliny lipoové s regulačními prvky insulin-signální kaskády. Významné zlepšení v pozdních diabetických komplikací, zejména polyneuropatii, bylo prokázáno několika klinickými studiemi. Nynější experimenty zkoumají, zda-li může mít kyselina lipoová blahodárný vliv nejen v léčbě diabetu, ale také v prevenci kardiovaskulárního onemocnění. Kyselina lipoová upravuje pružnost cévní stěny, kdy magnetickou rezonancí a morfologickou analýzou bylo prokázáno, že snižuje rozvoj aterosklerotických plátů nejen snížením množství zánětlivých buněk, ale i obsahu tuků. Pro stanovení kyseliny lipoové existuje mnoho metod. Nicméně, většina z těchto metod není uspokojivá vzhledem k jejich nespecifitě, nedostatku citlivosti, dlouhodobé přípravě vzorku a potřebě drahých analytických zařízení. Snažili jsme se vytvořit jednoduchou a účinnou metodu pro stanovení redukované a oxidované formy kyseliny lipoové v lidské plasmě pomocí HPLC s elektrochemickou detekcí na principu coulometrie. Zjistili jsme, že metoda je použitelná pro stanovení pouze oxidované formy. Během přípravy vzorku plasmy docházelo ke ztrátám redukované formy. Jako příčinu těchto ztrát jsme zatím vyloučili deproteinaci a časovou nestabilitu při úpravě vzorku. K vyřešení tohoto problému bude třeba ještě další upravování přípravy vzorku.

Abstract:

Lipoic acid is a disulfhydryl-containing compound used in clinical medicine and in experimental models as an antioxidant. Both reduced and oxidized forms have antioxidant properties and regulate recycling of other oxidized antioxidants. There is growing evidence that lipoic acid may be a very important diabetes therapeutic agent. In diabetic patients receiving lipoic acid ether intravenously or orally was observed improvement in glucose disposal. The reason is the interaction of lipoic acid with regulatory components of the insulinsignaling cascade. Several clinical trials showed significant improvement in late diabetic complications, especially in polyneuropathies. Current trials are investigating whether beneficial properties of lipoic acid make it an appropriate treatment not just for diabetes, but also for the preventiv cardiovascular diseases. It is known, that lipoic acid regulates the elasticity of vessel wall and Magnetic Resonance Imaging analysis and morphological analysis demonstrated that lipoic acid reduced atherosclerotic plaques by reduction not only inflammatory cell but also lipid content. Many methods are available for the analysis of lipoic acid. Nevertheless, most of these methods are not satisfactory due to their non-specificity, lack of sensitivity, long-term sample preparation and need for expensive analytical equipment. We tried to develop simple and effective method for determination of reduced and oxidized forms in human plasma by using HPLC with electrochemical detection on the principle of coulometry. We have found out that method is usable for determination of plasma level only oxidized form of lipoic acid and reduced form is eliminated during sample preparation. We can exclude time-instability and protein removing as reasons for this elimination reduced form of lipoic acid. Next examination of sample-preparation is needed for explanation this problem.

Klíčová slova

kyselina lipoová, ateroskleróza, stanovení v lidské plasmě, elektrochemická detekce

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 6. 5. 2010

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 1. 6. 2010
• Vedoucí: Mgr. Pavla Královcová, Ph.D.

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Speciální chemicko-biologické obory / Analýza biologických materiálů