Rod Haemophilus a jeho laboratorní vyšetření v současné medicíně

Jana KADLECOVÁ

Bachelor's thesis

Genus Haemophilus and laboratory examinations in medicine today

Abstract:

Bakalářská práce, kterou jsem vypracovala, je zaměřena na nejhlavnější patogen rodu Haemophilus, a to Haemophilus influenzae. H. influenzae je původcem závažných infekcí, hlavně jeho typ b, který je nejvíce virulentním organismem, způsobující invazivní onemocnění hlavně u dětí a starších lidí, např. meningitidu a chronickou obstrukční plicní nemoc. V teoretické části se věnuji charakteristice rodu hemofilů i klinickým významům nejznámějších druhů vyskytujících se v současné době. Rod Haemophilus je aerobní a fakultativně anaerobní gram negativní bakterie, která je charakteristická svými náročnými požadavky na růst. K diagnostice byly použity metody, a to test s růstovými faktory jako běžná dlouho uznávaná diagnostická metoda, která rozliší jednotlivé hemofily podle jejich závislosti na růstových faktorech. Jelikož tato metoda je náročná jak finančně, tak i časově, je její zpracování zdlouhavé a nepřesné. Proto dnes díky pokroku technologie byla zavedena novější metoda MALDI TOF hmotnostní spektrometrie (MS). Svým rozvojem umožňuje snadnější, rychlejší a přesnější diagnostiku i těch nejnáročnějších bakterií, kvasinek a hub. Diagnostika MALDI TOF MS se vyznačuje nespornou spolehlivostí a nákladovou efektivností. Jako základní léčebná metoda proti hemofilům se užívá - laktamová antibiotika, především antibiotikum co-amoxicilin a chloramfenikol. Kromě antibiotické léčby lze dnes vzniku závažných infekcí předejít i očkováním tzv. Hib vakcínou. V praktické části byly popsány postupy a laboratorní diagnostika hlavního patogenu H. influenzae metodou MALDI TOF MS a testem na růstové faktory v mikrobiologické laboratoři Synlab, czech s.r.o., v Českých Budějovicích. Pro znázornění četnosti výskytu H. influenzae v jednotlivých ročních období za rok 2013 byly výsledky získány z laboratorního informačního systému laboratoře ze vzorků dopravených z terénních ordinací od praktických lékařů z Jižních Čech a zpracovány do statistických údajů. Cílem práce bylo izolovat rod Haemophilus z horních cest dýchacích a identifikovat hlavní potenciální patogen tohoto rodu. Dále mým cílem bylo porovnat spolehlivost a náročnost jednotlivých diagnostických metody při jeho určování. Hypotéza 1: Četnost výskytu H. influenzae v roce 2013 závisí na ročním období. Hypotéza 2: Metoda MALDI-TOF MS je spolehlivou a rychlou metodou pro identifikaci rodu Haemophilus, na rozdíl od rutinního diagnostického testu s růstovými faktory. Z výsledků lze usoudit, že četnost výskytu H. influenzae v roce 2013 závisí na ročním období. Hemofily jsou náročné a citlivé bakterie na kultivaci a vyžadují ke svému růstu optimální podmínky. V případě přítomnosti virového onemocnění v tomto období se incidence výskytu zvyšuje a může tak zásadně ovlivnit průběh léčby. Při porovnání použitých metod se mi podařilo potvrdit i hypotézu 2 a prokázat, že metoda MALDI TOF MS je užitečná v diagnostice. Je to metoda nenáročná a díky rychlému zpracování vzorku umožní získat výsledek během několika minut. Závěrem práce lze tedy říci, že metoda MALDI TOF MS je rychlý, spolehlivým a výkonným diagnostickým nástrojem pro identifikaci mikroorganismů. Díky rychlé odezvě a minimálním nákladům na spotřební materiál na vzorku ve srovnání s konvenčními identifikačními metodami se MALDI TOF MS stal možným efektivním nástrojem taxonomické klasifikace a mikrobiologické studie.

Abstract:

My bachelor´s thesis focuses on the most major pathogen of the genus named Haemophilus, and Haemophila influenzae. H. influenzae is an originator of more serious infections, mainly its type b, which is the most virulent organism, causing invasive diseases mainly with children and older people. It causes mainly meningitis and chronic obstructive pulmonary disease. In the theoretical part of my bachelor´s thesis I write about the genus Haemophilus and clinic significances of the most famous species which occur at present. The genus Haemophilus is an aerobic and a facultative aerobic gram that means it is a negative bacteria, which is characteristic for its arduous requests for accretion. I used some methods for the diagnosis. I used the following methods a test with growth factors, which is a common diagnostic method, which distinguishing Haemophilus according to their addiction to the growth factors. This method is financially very demanding and currently the mason being why its results are not so accurate. But thanks to a new technology a more modern method called MALDI TOF weight spektronomie (MS) was found, which is easier, quicker and more accurate than the first one. MALDI TOF enables a diagnosis of the most demanding pieces of bacteria, yeast and mushrooms. The MALDI TOF diagnosis is characterized by undisputed reliability and cost effectiveness. Lactam antibiotics, mainly antibiotics - co-amoxicilin and chloramfenikol are used as treatment methods against Heamophilus. Against serious infections can one protect themselves with a vaccination the Hib vaccination. In the practical part of my bachelor´s thesis I described some processes and laboratory diagnostics of the pathogen H. influenza by methods MALDI TOF MS and by the Test for growth factories in a microbiological laboratory named Synlab, czech s.r.o., in České Budějovice. The results of how frequently H. influenza occurred in the year 2013, were gained from of the previously mentioned laboratory information system and were transported into the other laboratory from a field office of general practisioners. The other aim of my bachelor´s thesis was to compare severity and of each method. HYPOTHESIS 1: The frequency of H. influenzae in the year 2013 depends on a season. HYPOTHESIS 2: The MALDI TOF MS method is reliable and fast for identification of the genus Haemophilus. The Test with growth factories is not so reliable and fast. From the results it is obvious that the frequency of H. influenzae depends on the season. Heamophilus are very demanding and sensitive bacteria for cultivation and they need optimal conditions for their accretion. In this season the viral diseases increase and they can affect the process of the treatment. During the comparison of these two methods I managed to prove that the second hypothesis MALDI TOF is useful in a diagnosis. This method is not demanding. And the result can be obtained in a few minutes. At the end of my thesis it can be said that the MALDI TOF MS method is fast, reliable and an efficient diagnosis tool for identification of microorganisms. MALDI TOF MS has become an effective method for taxonomic classifications and microbiological studies. The MALDI TOF MS method is fast and there are minimal costs for consumables in samples.

Keywords

rod Haemophilus, H. influezae, MALDI TOF MS, test s růstovými faktory, laktamová antibiotika

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 11. 8. 2014

Accessible from:: 11. 8. 2014

Thesis defence

• Supervisor: MUDr. Radim Kramář, CSc.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician