Posouzení diferenciálního rozpočtu leukocytů na automatickém analyzátoru a mikroskopicky

Iva BAMBULOVÁ

Bachelor's thesis

Assessment of differential number of leukocytes in automatic analyzer and microscopically

Abstract:

Vyhodnocení krevního obrazu s diferenciálním rozpočtem leukocytů patří k základním hematologickým vyšetřením. Z diagnostického hlediska je informace o přesném počtu leukocytů a jejich procentuálním zastoupení v krvi pacienta velmi cenná, tak jako i pro řady informací o efektu léčby chorobných stavů. Ve své bakalářské práci se věnuji mikroskopickému a přístrojovému vyšetření diferenciálního rozpočtu leukocytů a jejich srovnání z hlediska náročnosti provedení a získání co nejpřesnějších výsledků. V dnešní době se spolu s rozvojem vědy a techniky využívají ke stanovení diferenciálního rozpočtu leukocytů moderní hematologické analyzátory, ovšem manuální stanovení pomocí mikroskopu zůstává i nadále základem dobré práce hematologické laboratoře. Cílem každého laboratorního stanovení je produkovat přesné výsledky pro klinické použití. Analýzy jsou většinou automatické a mezi jejich přednosti patří především rychlejší analýza, přesnost, spolehlivost a potřeba malého množství vzorku. Hlavními cíly mé bakalářské práce je vyhodnocení rozdílů za použití dvou různých metod, mikroskopické a přístrojové. Bakalářská práce je již tradičně rozdělena na část teoretickou a praktickou. V teoretické části bakalářské práce je vysvětlen význam diferenciální rozpočet leukocytů, podrobným způsobem je zde popsána morfologie jednotlivých typů leukocytů. Zmínila jsem se o nenádorových a nádorových změnách v počtu leukocytů. V neposlední řadě je zde uveden přehled laboratorních metod, které se používají pro vyšetření krevního obrazu v rutinní hematologické laboratoři. Ke stanovení diferenciálního rozpočtu leukocytů se využívá metoda optická, metoda elektrické impedance, cytochemický průkaz či digitální morfologie. V praktické části práce je popsán metodický postup vyšetření diferenciálního rozpočtu leukocytů, který jsem v rámci této práce použila. Při mikroskopickém stanovení jsem vytvořila krevní nátěr, který jsem obarvila dle návodu. Preparáty se prohlíží za použití imerzního oleje pod světelným mikroskopem. K záznamu jednotlivých typů leukocytů se používají záznamové přístroje ? leukomaty. Automatické stanovení diferenciálního rozpočtu leukocytů jsem prováděla na 5ti - populačním hematologickém analyzátoru Sysmex XE - 2100, založeném na principu průtokové cytometrie s možností měření vzorků z podavače uzavřeným způsobem nebo s otevřeným způsobem měření. Vyšetření diferenciálních rozpočtů leukocytů jsem realizovala v biochemicko - hematologické laboratoři synlab czech s.r.o v Českých Budějovicích. Zde jsem vyšetřila pod odborným dohledem 100 pacientských náhodně vybraných vzorků venózní krve, u kterých jsem porovnávala diferenciální rozpočty leukocytů a rozdíly mezi metodami. Vzorky jsem vyšetřila v měsících duben, květen roku 2012. Výsledky získané při mikroskopickém vyšetření a naměřené pomocí analyzátoru byly statisticky zpracovány do přehledných tabulek a grafů v počítačovém programu. V grafickém znázornění porovnávám počty buněk diferenciálního rozpočtu ve 100 vzorcích na analyzátoru a pod mikroskopem. Stanovila jsem hypotézu, zda budou počty mikroskopických diferenciálů stejné jako počty od automatického analyzátoru. Vlastním měřením byly získány laboratorní výsledky, které byly po konzultaci s vedoucím práce interpretovány. Na základě výsledků jsem hypotézu zamítla. Vlastním laboratorním vyšetřením bylo prokázáno, že klasické mikroskopické hodnocení má nepostradatelný význam při analýze patologických buněk. Záleží také na zkušenostech laboratorního pracovníka. K přednostem hematologického analyzátoru patří především rychlejší analýza, p

Abstract:

řesnost a potřeba malého množství biologického vzorku. Během praktické části bakalářské práce jsem získala praktické dovednosti při práci s biologickým materiálem a osvojila jsem si principy laboratorních metod. Výsledky mé práce lze využít obecně v klinických laboratořích při posuzování výhod, nevýhod a souvislostí mezi jednotlivými sledovanými analytickými metodami.

Abstract:

Evaluation of blood count with differential leukocyte budget is a basic haematological test. From a diagnostic point of view is the information about the exact number of leukocytes and their percentage representation in the patient's blood very valuable as well as a range of informations on the effect of disease states. In my bachelor´s thesis I devote to instrumentative and microscopic examination of the differential leukocyte budget and their comparing in terms of difficulty and obtaining the most accurate results. Nowadays, with the development of science and technology are used to determine differential leukocyte budget modern haematological analyzers, but the manual setting by using a microscope remains the basis of good work in haematological laboratory. The goal of each laboratory determination is to produce accurate results for clinical use. The analyzes are mostly automatic and their advantages are faster pace of analysis, accuracy, reliability and need of small volume of sample. The main objective of my thesis is to evaluate the distinction by using two different methods, microscopical and instrumentative. The thesis is traditionally divided into theoretical and practical part. The theoretic part of the thesis explains the meaning of the differential leukocyte count, there is a detailed morfology description of different leukocyte types. I mentioned the non-neoplastic and neoplastic changes in the number of leukocytes. Last but not least, there is an overview of laboratory methods that are used for blood counts in routine haematological laboratory. To determine differential leukocyte budget is used optical method, electrical impedance method, cytochemical method or digital morphology. The practical part describes the examination methodology of the differential leukocyte budget, which I have used in this work. I made a blood smear by microscopic assessment, which I dyed according the instructions. Preparates are viewed with oil immersion under a light microscope. To record different leukocyte types are used recording devices - leucomats. I made automatic assessment of differential leukocyte budget in 5 - population haematological analyzer Sysmex XE - 2100 based on the principle of flow cytometry with sample measurements from the feeder closed or open way. Examination of differential leukocyte budgets was realized in biochemical and haematological laboratory synlab czech s.r.o in Czech Budweis. Here I investigated 100 randomly selected patient samples of venous blood under the proffesional supervision and I compared the differential leukocyte budgets and differences between methods. I investigated samples in April and May of 2012. Results obtained by microscopic examination and by measurements on analyzer were statistically compiled into tables and graphs in a computer program. In the graphical representation comparing the differential cell counts in 100 samples of the budget of the analyzer under a microscope. I set the hypothesis that the numbers of microscopic differentials equal to those of the automatic analyzer. Laboratory results were obtained by the measurement and that results were interpreted after consultation with the supervisor. Based on the results, I rejected the hypothesis. Own laboratory investigation showed that classic microscopic assessment has essential importance in the analysis of pathological cells. It also depends on the experience of the laboratory worker. The advantages of the haematologic analyzer are particularly rapid analysis, accuracy and need of small volume of biological sample. During the practical part of the thesis I gained practical skills in working with biological material and I embraced the principles of laboratory methods. The results of my work can be used widely in clinical laboratories in assessing the advantages and disadvantages of relationships between monitored by analytical methods.

Keywords

Diferenciální rozpočet leukocytů, hematologické analyzátory, krevní nátěr, leukocyty, optická metoda

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 3. 5. 2013

Accessible from:: 3. 5. 2013

Thesis defence

• Supervisor: MUDr. Václava Lorencová

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician