Histologické a histochemické metody při studiu vývoje samčích pohlavních orgánů

Bc. Martina VÁVROVÁ

Bachelor's thesis

Histological and histochemical methods used in study of development of internal male sex organs

Abstract:

Předložená práce se věnuje srovnávacímu studiu využitelnosti fixačních činidel a barvících metod pro studium histologie a histochemie samců komárů Culex pipiens s.l. Studie probíhala u samců druhu Culex pipiens quinquefasciatus Say, který je významným přenašečem filariozy. Histologické či histochemické studie struktury celých zadečků nebo vypreparovaných varlat se prováděly na materiálu fixovaném fixačními činidly {--} Carnoy a Boiun, modifikace Dubosque-Brasil. Fixovaná tkáň se zalévala do paraplastu nebo pryskyřice. Histologické řezy se dělaly pomocí automatického mikrotomu Leica a polotenké řezy pomocí ultramikrotomu Reichert. Řezové preparáty se barvily Mayerovým nebo Harrisovým hematoxylinem nebo barvící metodou dle Malloryho. Polotenké řezy z materiálů zalitých do pryskyřice se barvily toluidinovou modří. Fixační činidlo Bouin, modifikace Dubosque-Brasil se ukázalo jako vhodnější než Carnoy a to jak pro přípravu parafinových řezů tak i pro zhotovení polotenkých řezů z tkání zalitých do pryskyřice. Další výhodou této fixáže je, že fixovaná tkáň se v ní dá uchovávat neomezeně dlouhou dobu aniž by došlo k přefixování tkáně jako je tomu v případě fixáže Carnoy. Pro přehledné histologické preparáty je z použitých metod zřejmě nejvhodnější Malloryho barvení, poskytuje lepší orientaci v barvené tkáni díky celé škále barev - růžové až červené barvení buněčných jader, modré zbarvení vaziva a sekretů. V případě barvení samčích pohlavních orgánů se zdají být jednotlivá použitá barvení (Mallory, Harrisův a Mayerův hematoxylin) srovnatelná. Zalévání do pryskyřice ve spojení s barvením toluidinovou modří (též histochemický průkaz pro sacharidy) se ukázalo jako vhodné pro znázornění jemnějších struktur, v samčích pohlavních orgánech byly zřetelně odlišeny jednotlivé vývojové fáze samčích pohlavních buněk.

Abstract:

Presented thesis devotes to comparative study of usability of fixation agents and colouring methods for the study of histology and histochemistry of Culex pipiens s.l. mosquito males. The study was carried out in males of Culex pipiens quinquefasciatus Say, which is a significant transmitter of filariasis. Histological and histochemistry studies of the structure of the whole abdomens or prepared testicles were carried out on the material fixed by fixation agents Carnoy and Bouin of Dubosque-Brasil modification. Fixed tissue was cast in paraplast or resin. Histological sections were done by means of automatic microtome Leica and half-thin sections by means of ultra microtone Reichert. Section preparations were coloured by Mayer or Harris haematoxylin or by colouring method according to Mallory. Semi-thin sections from materials cast in resin were coloured by toluidine blue. Fixation agent Bouin, Dubosque-Brasil modification proved as more convenient than Carnoy, either for the preparation of paraffin sections or for fabrication of half-thin sections from tissues cast in resin. The next advantage of this fixation is that fixed tissue can be stored for unlimited period of time without over fixation of the tissue as it is in the case of fixation by Carnoy. For general histological preparations Mallory colouring is apparently the most convenient from the used methods; it provides better orientation in coloured tissue thanks to the whole spectrum of colours-pink to red colouring of cell nuclei, blue colouring of tissue and secretions. In case of colouring of male genital organs all used colourings (Mallory, Harris and Mayer haematoxylin) seem to be comparable. Casting in resin with connection to colouring by toluidine blue (also histochemistry proof for carbohydrates) has shown to be suitable for visualisation of finer structures, in male genital organs particular developmental phases of male sex cells were distinguished.

Keywords

Komár, histologie, histochemie, barvící metody, Mallory, hematoxylin, samčí pohlavní orgán

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 14. 5. 2008

Accessible from:: 14. 5. 2008

Identifier: 9986

Thesis defence

• Date of defence: 24. 6. 2008
• Supervisor: doc. RNDr. Ivan Gelbič, CSc.

University of South Bohemia in České Budějovice

Faculty of Health and Social Studies

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician