Využití "stain-free" metody detekce proteinů v polyakrylamidových gelech pro kvantitativní analýzu proteinů imunoblotem

Eva FORMÁNKOVÁ

Bakalářská práce

The use of stain-free protein detection method in polyacrylamide gels in quantitative analysis of proteins by immunoblotting

Anotace:

Bakalářská práce v teoretické části shrnuje nejpoužívanější metody detekce proteinů v polyakrylamidových gelech (PAGE) a metody kontroly obsahu celkových proteinů při imunoblotingu. V úvodu je zmíněn princip a význam elektroforézy a imunoblotingu v analýze proteinů. Hlavní zaměření této práce je na novou stain-free metodu detekce proteinů. Stain-free metoda využívá trihalogenové látky trichlorethanolu (TCE) přidané do gelu, která po následujícím krátkém UV ozáření modifikuje tryptofany v proteinech. Výsledný tryptofanový adukt s TCE dává fluorescenční signál, který je detekován pomocí zobrazovacích zařízení, např. CCD kamerami. V praktické části byly vyzkoušeny metodiky elektroforézy v polyakrylamidových ge-lech a imunoblotu, detekce celkových proteinů v polyakrylamidových gelech vybranými metodami, včetně stain-free metody a aplikace metod na detekci heat-shock proteinů v extraktech Arabidopsis thaliana a Solanum lycopersicum cv. Micro-Tom. Byla zavedena metoda stain-free gelů, které byly aplikovány na vlastní experimenty s rostlinnými vzorky.

Abstract:

In the theoretical part of the bachelor thesis there are summarized the most used methods of detection of proteins in polyacrylamide gels (PAGE) and methods of control of total protein in immunoblotting. The introductory chapter summarizes principles and impor-tance of electrophoresis and immunoblotting. This thesis is mainly focused on new stain-free technology of detection of proteins. Stain-free method uses a trihalo compound trich-loroethanol (TCE) added to gel, which modificates tryptophans in proteins after short exposition to UV radiation. Tryptophan adduct provides a fluorescence signal, which is detected by imaging systems, for example CCD cameras. In practical part methods of polyacrylamide gel electrophoresis and immunoblotting, detection of total proteins by selected methods, including stain-free method and applica-tion of methods for detection of heat-shock proteins in extracts of Arabidopsis thaliana and Solanum lycopersicum cv. Micro-Tom were tested. The stain-free gels method has been introduced and applied in experimental analysis of plant samples.

Klíčová slova

Detekce proteinů, polyakrylamidová elektroforéza, imunobloting, stain-free

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 4. 5. 2016

Zveřejnit od: 4. 5. 2016

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: doc. Mgr. Marek Petřivalský, Dr.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie