Imobilizace alfa-amylas na magnetické nosiče

Martina Pospíšilová

Master's thesis

Immobilization of alpha-amylases on magnetic carriers

Abstract:

Teoretická část této diplomové práce se zabývá klasifikací amylolytických enzymů, obvzláště alfa-amylasami. Dále jsou zde popsány rozličné techniky ukotvení enzymů na pevné nosiče a vlastnosti, příprava a použití magnetických nosičů. Experimentální část se věnuje zejména kovalentní imobilizaci alfa- amylas (vepřový pankreas, Bacillus subtilis) na magnetické mikro- a nanočástice (Fe3O4 obalené chitosanem), kde magnetické nosiče byly aktivovány glutaraldehydem popř. karbodiimidem a N-hydroxysukcinimidem. U volných a imobilizovaných alfa-amylas byla stanovena specifická aktivita, teplotní a operační stabilita, stabilita při skladování. Dále byla u bakteriální alfa-amylasy provedena chemická modifikace lysylových zbytků pomocí beta-cyklodextrinu. U modifikovaného enzymu byla stanovena molekulová hmotnost, specifická aktivita a teplotní stabilita

Abstract:

The theoretical part of this diploma thesis deals with classification of amylolytic enzymes, especially alpha- amylases. It also describes several techniques of enzyme immobilization on solid supports and properties, preparation and applications of magnetic carriers. The experimental part is focused mainly on covalent immobilization of alpha-amylases (porcine pancreas, Bacillus subtilis) on magnetic micro- and nanoparticles (Fe3O4 coated with chitosan). Magnetic carriers were activated by using glutaraldehyde or carbodiimide and N-hydroxysuccinimide. The properties (specific activity, thermostability, operational and storage stability) of immobilized enzymes were investigated and compared with those of free ones. In addition, chemical modification of lysine residues in bacterial alpha-amylase was carried out using beta-cyclodextrine. Modified enzyme was characterized in terms of molecular mass, specific activity, and thermostability

Keywords

alfa-amylasa, magnetické částice, imobilizace enzymů, chemická modifikace

Keywords

alpha-amylase, magnetic particles, enzyme immobilization, chemical modification

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 28. 4. 2010

Thesis defence

• Date of defence: 21. 5. 2010
• Supervisor: Ludmila Zajoncová
• Reader: Marek Petřivalský

Univerzita Palackého

Přírodovědecká fakulta

Master programme / field:
Biochemie / Biochemie