Izolace 2-methylthio-cytokininů mikroextrakcí polymerním monolitem

Jakub KOŘISTKA

Bakalářská práce

Isolation of 2-methyltio-cytokininin by polymer monolith microextraction

Anotace:

Tato práce se zaměřuje na analýzu 2-methylthio derivátů cytokininů izolovaných z kultivačního média bakterie Rhodococcus fascians. Cílem této práce bylo vyvinout rychlou purifikační metodu a zrychlit metodu koncové analýzy šesti 2-methylthio-derivátů cytokininů. Kromě použití klasické extrakce na pevné fázi (SPE) se v této práci podařilo vyvinout jednoduchou, rychlou a levnou jednokrokovou purifikační metodu - mikroextrakci polymerním monolitem (PMME) s využitím kopolymeru 2-akrylamido-2-methyl-1-propansulfonové kyseliny a ethylendimethakrylátu - poly(AMPS-co-EDMA. Tato purifikační metoda je až desetkrát rychlejší než klasická SPE. Při vývoji UHPLC metody analýzy těchto šesti 2MeS derivátů cytokininů byl použit systém reverzních fází. Po nalezení vhodné stacionární fáze a chromatografických podmínek se podařilo celkovou dobu analýzy těchto šesti derivátů 2MeS cytokininů zkrátit na třetinu (17 minut), proti metodě původní. Závěrem byla kombinace mikroextrakce polymerním monolitem a ultraúčinné kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní detekcí použita ke kvantitativní analýze dominantního derivátu (2MeS-cis-zeatin) izolovaného z kultivačního média Rhodococcus fascians D188.

Abstract:

This work focuses on the analysis of 2-methylthio derivatives of cytokinins isolated from the supernatant of bacteria Rhodococcus fascians. The main objectives of this work were to develop a rapid purification method and acceleration of UHPLC-MS/MS method for the final analysis of six 2-methylthio-derivatives cytokinins. Besides using the classic solid phase extraction (SPE) in this work, we developed a simple, fast and inexpensive one-step purification method polymeric monolith microextraction (PMME) by using a copolymer of 2-acrylamido-2-methyl-1-propanesulfonic acid and ethylenedimethacrylate - poly(AMPS-co-EDMA). This purification method is up to ten times faster than classic SPE. During developing UHPLC method of analysis of these six 2MeS derivatives cytokinins was used a system with the reversed-phase. After selecting a suitable stationary phase and chromatographic conditions, a total analysis time was reduced to one-third (17 minutes) in comparison with original method. Finally, the combination of a polymeric monolith microextraction and ultrahigh performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry is used for quantitative analysis of dominant derivative (2MeS-cis-zeatin) isolated from the bacterial culture of Rhodococcus fascians D188.

Klíčová slova

cytokininy, 2-methylthio-deriváty cytokininů, extrakce, purifikace cytokininů, profilování cytokininů

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 5. 5. 2014

Zveřejnit od: 5. 5. 2014

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Doc. RNDr. Petr Tarkowski, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie