Stanovení karbohydrát-deficientního transferinu v lidském séru (CDT) různými analytickými technikami

Zdeněk VAVŘINA

Bakalářská práce

Determination of carbohydrate-deficient transferrin in human serum (CDT) by various analytical techniques

Anotace:

Cíl práce: Tato práce se zabývá verifikací základních charakteristik za podmínek opakovatelnosti a reprodukovatelnosti 3 analytických systémů pro stanovení karbohydrát-deficientního transferinu (CDT), jejich porovnáním s výsledky isoelektrické fokusace (IEF) a vyhodnocením sensitivity a specificity stanovení CDT. Materiál a metody: Ke statistickému zpracování dat bylo využito výsledků 140 pacientských vzorků (48 žen, 102 mužů; věkový průměr 51,5 ? 13,1 let). Vzorky byly získány od pacientů z odborných ambulancí z oblasti Moravskoslezského kraje, podezřelých na abusus alkoholu. Stanovení probíhala dle validovaných postupů na analytických systémech Bio-Rad Variant (HPLC), Sebia MiniCap (kapilární elektroforéza) a Siemens BN ProSpec (imunonefelometrie). Současně byla využita in-house metoda IEF s neafinitním blottingem a chromatogenní detekcí zavedená na Oddělení klinické biochemie, Ústavu laboratorní diagnostiky, Fakultní nemocnice Ostrava. Statistické vyhodnocení probíhalo v softwaru MedCalc a MS Excel. Výsledky: Byly verifikovány metody stanovení CDT na systémech BN ProSpec, Variant a MiniCap. Nejmenší variační koeficienty mezilehlé preciznosti vykazoval imunonefelometr BN ProSpec. Pro verifikaci Biasu jednotlivých metod byly použity hodnoty kontrolních vzorků deklarované výrobci komerčních kontrol. Všechny tři analyzátory vykázaly Bias v rozmezí povoleném výrobci. Při srovnání pacientských vzorků na systémech Variant a BN ProSpec poskytovala Passing-Bablokova regrese korelační koeficient (r = 0,847; p<0,0001) a Bland-Altmanův diferenční graf v absolutních hodnotách (r = 0,874; p<0,0001) a v relativních hodnotách (r = 0,351; p<0,0001). U srovnání systémů Variant a MiniCap poskytovala Passing-Bablokova regrese (r = 0,861; p<0,0001) a Bland-Altmanův diferenční graf v absolutních hodnotách (r = 0,390; p<0,0001) a relativních hodnotách (r = 0,143; p<0,0001). Pro srovnání systému Variant a IEF vyšla Passing-Bablokova regrese (r = 0,474; p = 0,0006) a Bland-Altmanův diferenční graf v absolutních hodnotách (r = 0,369; p<0,0001) a absolutních hodnotách (r = 0,282; p<0,0001). Nejvyšší sensitivita a specificita byla ROC analýzou stanovena pro MiniCap (94,83 %; 100,00 %). Závěr: Nejmenší CV mezilehlé preciznosti vykazoval imunonefelometr BN ProSpec. Při analýze pacientských vzorků ve srovnání s referenční metodou HPLC vykazovala nejlepší shodu výsledků metoda kapilární elektroforéza na analyzátoru MiniCap, současně vykazovala i nejvyšší sensitivitu a specificitu.

Abstract:

Objective: Aim of this thesis was verification of basic characteristics conditions of repeatability and reproducibility on three analytical systems for determination of carbohydrate-deficient transferrin (CDT), their comparison with results of an isoelectric focusing (IEF), and an evaluation of sensitivity and specificity of CDT determination. Material and methods: For data statistical processing were used results of 140 patient samples (48 women, 102 men; age mean 51.5 ? 13.1 years). Samples were gained from outpatient clinics mainly from Moravian-Silesian Region from people with suspicion of alcohol abuse. Determinations were realised according to validated procedures on analytical systems Bio-Rad Variant (HPLC), Sebia MiniCap (capillary electrophoresis) and Siemens BN ProSpec (immunonephelometry). Also the in-house IEF method with non-affinity blotting and chromogenic detection, established at the Department of clinical biochemistry, Institute of laboratory medicine, University hospital Ostrava, was used. Results were statistically evaluated by using MedCalc and MS Excel software. Results: The methods of determination of CDT on the analytical systems BN ProSpec, Variant and MiniCap were verified. The lowest coefficients of variation of intermediate precision were stated on BN Prospec. To verify Bias of each method, the values of control samples declared by manufacturers of commercial controls were used. All the analyzers have had Bias in allowed range. For patient samples analyze on the systems Variant and BN ProSpec, the Passing-Bablok regression provided a correlation coefficient (r = 0.847; p<0.0001) and the Bland-Altman differential diagram in absolute values (r = 0.874; p<0.0001) and in relative values (r = 0.351; p<0.0001). Comparing the Variant and MiniCap systems, the Passing-Bablok regression provided (r = 0.861; p<0.0001) and the Bland-Altman differential diagram in absolute values (r = 0.390; p<0.0001) and in relative values (r = 0.143; p<0.0001). For comparison Variant system and IEF, the Passing-Bablok regression (r = 0.474; p=0.0006) and the Bland-Altman's difference diagram in absolute values (r = 0.369; p<0.0001) and in relative values (r = 0.282; p<0.0001). The highest sensitivity and specificity (94.83 %; 100.00%) determined by ROC analysis for the MiniCap system. Conclusion: The smallest coefficient of variation of intermediate precision had immunonephelometry (BN ProSpec). Capillary electrophoresis (MiniCap) had best match for the results of patient samples analysis, when compared with reference HPLC method. MiniCap had also the highest sensitivity and specificity.

Klíčová slova

karbohydrát-deficientní transferin, abusus alkoholu, kapilární elektroforéza, imunonefelometrie, HPLC, isoelektrická fokusace

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 28. 4. 2017

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 7. 6. 2017
• Vedoucí: RNDr. Pavlína Kušnierová, PhD.

OSTRAVSKÁ UNIVERZITA

Lékařská fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Specializace ve zdravotnictví / Zdravotní laborant