Enzymem funkcionalizované nanočástice jako značky protilátek v imunosenzorech

Mgr. Aneta Kovářová

Diplomová práce

Enzyme-modified nanoparticles as antibodies labels in immunosensors

Anotace:

Cílem této diplomové práce bylo značení protilátek enzymem modifikovanými nanočásticemi (konjugát), které jsou využitelné pro kvantitativní elektrochemickou detekci antigenu pomocí imunosenzoru založeném na ELISA principu. Imunosenzor je tvořen primárními anti-ApoE protilátkami (IgG) imobilizovanými na magnetických částicích, proteinem ApoE jako antigenem a připravenými sekundárními anti-ApoE protilátkami (IgG) značenými enzymem modifikovanými mezoporézními křemičitými nanočásticemi (MSN). Jako enzymy byly využity křenová peroxidáza (HRP) a alkalická fosfatáza (ALP). Dílčí kroky spočívaly v nalezení optimálního množství enzymů imobilizovaných na nanočástice, určení optimálního ředění připravených konjugátů, a jejich funkčnost byla nakonec ověřena sestavením kompletních imunosenzorů. Pro elektrochemickou detekci byly využity miniaturizované tištěné tříelektrodové senzory, lineární a square wave voltametrie jako detekční techniky.

Abstract:

The aim of the thesis was labeling of antibodies with enzyme modified nanoparticles (conjugate), which are used for quantitative electrochemical detection of an antigen by using immunosensor based on the ELISA principle. The immunosensor is formed by primary anti-ApoE antibodies (IgG) immobilized on magnetic particles, protein ApoE as an antigen and prepared secondary anti-ApoE antibodies (IgG) labeled with enzyme modified mesoporous silica nanoparticles (MSN). Horseradish peroxidase (HRP) and alkaline phosphatase (ALP) were used as enzymes. Substeps consisted of finding the optimum amounts of the enzymes immobilized on nanoparticles, determining of optimal dilution prepared conjugates and their functionality was finally verified by constructing complete immunosensor. For electrochemical detection were used miniaturized three-electrode printed sensors, linear and square wave voltammetry as a detection technique.

Klíčová slova

křenová peroxidáza, alkalická fosfatáza, mezoporézní křemičité nanočástice, značené protilátky, imunosenzory

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 7. 5. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 2. 6. 2015
• Vedoucí: RNDr. Lucie Korecká, Ph.D.

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Speciální chemicko-biologické obory / Analýza biologických materiálů