Vytvoření a charakterizace transgenních linií drozofil manifestující neurodegenerativní onemocnění spinocerebelární ataxi typu 1 (SCA1)

Veronika JIČÍNSKÁ

Bachelor's thesis

Anotácia:

Cílem této bakalářské práce bylo pomocí GAL4/UAS sytému vytvořit a charakterizovat transgenní linie Drosophila melanogaster manifestující spinocerebelární ataxii typu 1 (SCA1). Pro všechny experimenty byli použiti 5denní a 30denní samci. Byl sledován vliv SCA1 u manifestujících linií na mobilitu, délku přežití a neurodegenerativní změny na mozku. Kromě těchto fyziologických metod byla testována exprese specifických genů metodou kvantitativní RT-PCR a kvantifikace specifických protein pomocí metody Western Blot. Neurodegenerativní změny u manifestujících linií byly zkoumány pomocí konfokální mikroskopie. Exprese specifických genů, jako jsou Ataxin, MMP1 a MMP2, byla testována u všech testovaných linií manifestujících SCA1 ve srovnání s kontrolními liniemi. Výsledky naznačují, že exprese hAtXN1 byla vyšší u linií manifestujících SCA1 oproti kontrolám. Nicméně trend exprese MMP není zcela zřejmý a bude předmětem navazující magisterské práce.

Abstract:

The aim of this thesis was to generate and characterize transgenic lines of Drosophila melanogaster manifesting spinocerebellar ataxia type 1 (SCA1), using GAL4/UAS system. Specific driver lines were used to express ataxin gene in pan neuronal, eye and motor neurons. Adult males from different crosses expressing abnormal ataxin gene with parallel controls aged 5 day and 30 day were used for all experiments. The effects of such expression on mobility, longevity and neurodegenerative changes in the brain was studied. Moreover, specific techniques such are RT-PCR, and western blotting were used to test expression of specific genes and to quantify level of specific proteins. Neurodegenerative changes in transgenic lines were documented using confocal microscopy. The expression of specific genes such as ataxin and matrix metalloproteinase 1 and 2 (dMMP1, dMMP2) was studied in all used fly lines. The results showed that gene expression of hAtXN1 was higher in lines manifesting SCA1 compared to controls. However, the trend of MMP expression was not completely clear and will be the subject of future research.

Kľúčové slová

Drosophila melanogaster, spinocerebelární ataxie typu 1 (SCA1), mobilita, RT-PCR, Western Blot, neurodegenerace

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 13. 4. 2021

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: RNDr. Andrea Bednářová, Ph.D.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Biology / Biomedical Laboratory Techniques