Izolace, purifikace a analýza oligosacharidů z mateřského mléka

Iva Mrvíková

Bachelor's thesis

Isolation, purification and analysis of oligosaccharides from human milk

Abstract:

Mateřské mléko je nejpřirozenější kojeneckou stravou. Přináší řadu významných bioaktivních látek, které přispívají ke správnému vývoji kojence. Je také významným zdrojem oligosacharidů s prebiotickými účinky, které slouží jako zdroj energie pro bakterie v trávicím traktu dítěte. Cílem této práce bylo izolovat a analyzovat oligosacharidy mateřského mléka, zjistit jejich množství v mateřském mléce a zhodnotit jejich celkový význam. Zároveň je v práci rozebrána problematika mléčných náhražek, výživa kojenců dárcovským mateřským mlékem a jejich výhody a nevýhody pro dítě. Oligosacharidy mateřského mléka byly izolovány pomocí gelové permeační chromatografie a dále podrobeny analýze na tenkovrstvé chromatografii, při které byly rozpoznány separované molekuly. Dále byly frakce podrobeny testu na přítomnost proteinů dle Bradfordové. Frakce, obsahující pouze oligosacharidy a proteiny v množství menší než 0,001 mg/ml byly odeslány k analýze do Švýcarska. Na základě této analýzy bylo zjištěno jejich složení. Ze zjištěných údajů o izolovaných oligosacharidech můžeme konstatovat, že prováděná separační metoda je spíše kvalitativní. Množství izolovaných oligosacharidů mateřského mléka se významně lišilo (P < 0,002) od množství, které je uváděno v odborné literatuře.

Abstract:

Human milk, which nourishes the early infants, is a source of bioactive components for the infant growth and a development as well. Human milk is a rich source of oligosaccharides, which are prebiotic and develop the immune system of the infant. Human milk oligosaccharides are a good source of energy and nutrients for the bacteria in the intestinal track of the infant. The objective of this thesis was to isolate oligosaccharides from human milk and analyse their amount in human milk and their importance for the infant. The thesis is also focused on the issue of human milk substitutes and their advantages and disadvantages for infants. Human milk oligosaccharides were isolated using gel permeation chromatography and thin layer chromatography. The thin layer chromatography is used to recognition and separation of molecules. The purity of each fractions was then confirmed by the Bradford protein assay. Some of the isolated fractions, containing only human milk oligosaccharides and protein in amount less than 0,001 mm/ml, were subsequently qualitatively analysed in Switzerland. The result of Bradford protein assay were composition of oligosaccharide fractions has been found out based on this analysis. The selected separation method is clearly qualitative as the quantity of human milk oligosaccharides were significantly different (P < 0,002) from quantity of human milk oligosaccharides started in the scientific articles.

Keywords

oligosacharidy mateřského mléka, izolace, purifikace, analýza, mateřské mléko

Keywords

human milk oligosaccharides, isolation, purification, analysis, human milk

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 17. 4. 2015

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Šárka Musilová, Ph.D.
• Reader: Veronika Legarová, Ph.D.

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Bachelor programme / field:
Agriculture, Horticulture and Rural Development / Nutrition and Foodstuffs