Studium kinetiky inhibice cholinesteras

Mgr. Markéta Kovářová

Doctoral thesis

Study of kinetics of acetylcholinesterace inhibition

Anotácia:

Byly studovány kinetiky neinhibovaných a inhibovaných hydrolýz acetylcholinu, resp. acetylthiocholinu pomocí acetylcholinesterasy. Ke stanovení kinetických parametrů hydrolýz acetylcholinu byly použity dvě metody, a to pH-statová metoda a HPLC metoda. HPLC metoda využívá paralelního stanovení koncentrace substrátu a obou produktů (cholinu a kyseliny octové) a tím poskytuje více informací než pH-statová metoda. Dále byla stanovena hodnota IC50, která byla zjištěna třemi metodami, a to Ellmanovou metodou, pH-statovou metodou a novou pH(t) metodou. Uvedené parametry byly stanoveny u 89 nových syntetických derivátů kyseliny karbamové, imidazolu a imidazolinu. U všech testovaných inhibitorů byl stanoven rozdělovací koeficient Kow v soustavě n-oktanol a voda. Byla vybrána skupina inhibitorů s nejlepšími hodnotami zmíněných parametrů, které byly testovány s lidskou AChE a u kterých byla stanovena cytotoxicita na buněčné linii karcinomu prsu.

Abstract:

Kinetics of non-inhibited and inhibited hydrolysis of acetylcholine and acetylthiocholine by acetylcholinesterase were studied. Two methods for determination of kinetics parameters of acetylcholine hydrolysis i.e. pH-stat and HPLC method were used. In order to determine concentration of substrate and two products (choline and acetic acid) simultaneously HPLC method was chosen. By using of HPLC method more complex information about inhibitors could be obtained in comparison to pH-stat method. The values of IC50 were determined by using of three methods: Ellman, pH-stat and new pH(t) method. In order to obtain parameters mentioned above new synthetic derivates of carbamic acid, imidazoles and imidazolines were chosen. Distribution coefficients Kow in system n-octanol and water were determined for all tested inhibitors. Inhibitors showing the best values of monitored parameters were chosen for further testing of rate of inhibition of human acetylcholinesterase. The cytotoxicity of inhibitors on cells line of breast carcinoma was also determined.

Kľúčové slová

Inhibice, cholinesterasy, karbamáty, imidazoly, imidazoliny, Alzheimerova choroba

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 9. 5. 2014

Zverejniť od: 31. 12. 2999

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 11. 6. 2014
• Vedúci: Mgr. Šárka Štěpánková, Ph.D.

University of Pardubice

Faculty of Chemical Technology

Doctoral programme / odbor:
Physical Chemistry / Physical Chemistry