Studium interakce Na+/K+-ATPasy s cisplatinou

Bc. Daniel KARAS

Diplomová práce

Studies of the Na+/K+-ATPase interactions with cisplatin

Anotace:

Cisplatina (cis-diaminodichloroplatina(II), CDDP), je antineoplastické léčivo používané při léčbě mnoha typů rakovin, zahrnující rakoviny hlavy, krku, plic, varlat, vaječníků a rakovinu prsu. Hlavním vedlejším efektem závislým na dávce u cisplatiny je nefrotoxicita. Cisplatina je schopna vázat se na DNA, ale také na různé proteiny. V experimentech byla sledována vazba cisplatiny nejprve na ubikvitin, cytochrom c a myoglobin a po zjištění interakcí s těmito proteiny byla studována podrobněji vazba cisplatiny k velké cytoplazmatické kličce Na+/K+-ATPasy. Na+/K+-ATPasa (E.C.3.6.1.37) je největší proteinový komplex P-typu ATPas zajištující transport 3 Na+ iontů ven a 2 K+ iontů dovnitř buňky a je esenciální pro savčí buňky. Byla objevena dánským vědcem J.C. Skouem, který za tento objev v roce 1997 získal Nobelovu cenu. Při studiu vazby cisplatiny bylo použito rekombinantní cytoplazmatické kličky Na+/K+-ATPasy z myši /mus musculus/ z toho důvodu, že se cisplatina díky snížené koncentraci Cl- v cytoplazmě aktivuje. Tato klička je z cytoplazmatických segmentů Na+/K+-ATPasy nejprostornější a tudíž vazba cisplatiny k ní je nejpravděpodobnější. Během experimentů bylo ověřeno jedno vazebné místo cisplatiny k proteinu a to na cysteinu 367 (pozice pro celou sekvenci Na+/K+-ATPasy)

Abstract:

Cisplatin (cis-diamminedichloroplatinum(II), CDDP) is an antineoplatic drug used in the treatment of many solid-organs cancers, including those of the head, neck, lung, testis, ovary, and brest. The main dose-limiting side effect of cisplatin is nephrotoxicity. Cisplatin is capable binds to DNA and variety of proteins. In experimental section was monitored a binding site of cisplatin to ubiquitin, cytochrome c and myoglobine and after finding of interactions with this proteins was in more detail studied how cisplatin binds to large cytoplasmic loop of Na+/K+-ATPase. Na+/K+-ATPase (E.C.3.6.1.37) is the biggest protein complex of P-type of APTases handling transport of 3 Na+ ions out and 2 K+ ions inside the cell and is essential for mammalian cells. Na+/K+-ATPase was discovered by danish scientist J.C.Skou, who obtained for this discovery the Nobel prize in 1997. During study of cisplatin binding was used recombinant cytoplasmic loop of murine /mus musculus/ Na+/K+-ATPase, because is cisplatin in cytoplasm activated though decrease of Cl- ions. This loop is the largest of cytoplasmic segments of Na+/K+-ATPase and the binding of cisplatin to her is likeliest. During experiments was veryfied one binding site of cisplatin to protein in cysteine 367 (position for whole Na+/K+-ATPase)

Klíčová slova

Cisplatina, Na+/K+-ATPasa, cystein, MALDI-TOF MS

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 23. 4. 2012

Zveřejnit od: 23. 4. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Prof. Mgr. Marek Šebela, Dr.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie