Lokalizace RNOS konfokální mikroskopií

Bc. Zuzana TULPOVÁ

Bachelor's thesis

Confocal microscopy in RNOS detection

Abstract:

Reaktivní formy kyslíku a dusíku (RNOS) jsou molekuly, které hrají významnou úlohu v metabolismu ţivočišných i rostlinných buněk a pravděpodobně i buněk hub. U hub a houbám podobných organismů jsou aktivní formy kyslíku a dusíku zmiňovány nejčastěji v souvislosti s fytopatologií, resp. se studiemi vztahů mezi hostitelskými rostlinami a původci mykóz. RNOS se podílejí na klíčení a procesu penetrace parazita do pletiv hostitele, či naopak na obranné odpovědi rostliny. Neméně zajímavým zjištěním je, ţe aktivní formy kyslíku i dusíku byly lokalizovány v těle lišejníků, přesněji v pletivu mykobiontů. Je známo, ţe se reaktivní formy kyslíku a dusíku podílejí na klíčení rostlin i hub. Zda ale nějak výrazně ovlivňují dynamiku klíčení houbových spor a morfologii jejich hyf nebylo podrobně studováno. V této bakalářské práci byl pomocí donorů a lapačů RNOS studován vliv těchto molekul na dynamiku klíčení a morfologii hyf vybraných smrţovitých hub, Morchella conica a Ptychoverpa bohemica, v úvodních fázích jejich vývoje. Bylo zjištěno, ţe vyšší koncentrace peroxidu vodíku podporuje růst hyf. Stejně tomu bylo i po zvýšení koncentrace oxidu dusnatého. Nicméně u oxidu dusnatého byl zaznamenán pozitivní vliv na růst hyf i v případě jeho nedostatku. Zvýšená koncentrace peroxidu vodíku i oxidu dusnatého také pozitivně ovlivnila tvorbu mikrosklerocií Morchella conica v delším časovém horizontu. Aktivní formy kyslíku a dusíku byly pomocí histochemické detekce lokalizovány konfokální mikroskopií v cytoplazmě klíčících spor a hyfách obou druhů.

Abstract:

Reactive nitrogen and oxygen species (RNOS) are molecules that play an important role in metabolism of animal and plant cells, and probably also in fungal cells. In respect to fungi and fungi-like organisms the RNOS are mentioned mainly in relation to phytopathology, esp. interactions between the host plants and the causes of mycoses. RNOS are involved in process of parasite germination and penetration into host tissues as well as in plant?s defence mechanisms. No less interesting is the fact that RNOS can be found in lichens, particularly in mycobiont cells. It is known that RNOS contribute to plant and fungal germination. However, it has not been studied in details whether RNOS influence the dynamics of fungal spores? germination and its hyphal morphology. This work studies effects of RNOS donors and scavengers on dynamics of fungal spores? germination and hyphal morphology of selected fungi ranked in the family of Morchellaceae, Morchella conica and Ptychoverpa bohemica, in their early stages of development. It was observed that higher concentration of both hydrogen peroxide but also nitric oxide induces hyphal growth. On the other hand, also the lack of nitric oxide has a positive effect on hyphal growth. Over a longer period, decreased concentration of NO positively influences production of Morchella conica microsclerotia. Histochemical staining was used to localize RNOS in our experiments by confocal microscopy. The signal was found in cytoplasm of germinating spores and hyphae of both species of fungi.

Keywords

Konfokální mikroskopie, ROS, RNS, Morchella conica, Ptychoverpa bohemica

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 6. 5. 2011

Accessible from:: 6. 5. 2011

Thesis defence

• Date of defence: 2. 6. 2011
• Supervisor: Doc. RNDr. Michaela Sedlářová, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biology / Molecular and Cell Biology