Molekulární analýza efektorových funkcí gamma-delta T lymfocytů u pacientů CLL

Bc. Nela Pichnerová

Bachelor's thesis

The molecular analysis of gamma-delta T-cell effector functions in CLL patiens

Abstract:

Chronická lymfocytární leukémie je nejčastěji se vyskytujícím hematoonkologickým onemocněním dospělého věku. Oblastmi s nejčastějším výskytem jsou státy západní Evropy a Severní Amerika. Je to onemocnění, které se klinicky manifestuje v pozdních stádiích, s čímž souvisí horší prognóza. Navíc má CLL nejvyšší incidenci kolem 70 let věku, což také značně komplikuje chemoimunoterapeutické postupy. V posledních letech se proto objevily snahy o buněčnou imunologickou léčbu, která by měla některým problémům chemoterapie předcházet. V této buněčné léčbě jsou hlavními aktéry modifikované T-lymfocyty namířené proti maligním B-lymfocytům, které jsou podávány pacientům s CLL. γδ T-lymfocyty jsou tzv. nekonvenčními T-lymfocyty, tvořícími minoritní populaci T-lymfocytů, kterým v minulosti nebyla příliš věnována pozornost. Objevily se však studie poukazující na jejich schopnosti cytotoxické aktivity vůči maligním buňkám solidních nádorů i hematoonkologických malignit. Γδ T-lymfocyty jsou buňky schopné reagovat na velké množství různých antigenů bez přítomnosti hlavního histokompatibilního systému, což tyto buňky může v některých případech činit účinnějšími v imunitní odpovědi než majoritní αβ T-lymfocyty. Existují studie poukazující na zvýšené zastoupení zejména Vδ1+ subpopulací γδ T-lymfocytů pacientů s CLL, což poukazuje na jejich zvýšenou reaktivitu vůči maligním buňkám CLL. Tyto poznatky dělají z γδ T-lymfocytů možné kandidáty na aplikaci v buněčné imunoterapií. V této bakalářské práci byla provedena imunofenotypická analýza zastoupení γδ populací T-lymfocytů u CLL pacientů a zdravých dárců. S využitím průtokové cytometrie byly souběžně analyzovány Vδ1+ a Vδ2+ subpopulace u zdravých dárců, CLL pacientů s pozitivním IgHV mutačním statusem a CLL pacientů s negativním IgHV mutačním statusem. Bylo pozorováno zvýšení zastoupení Vδ1+ a Vδ2+ subpopulací u negativního IgHV mutačního statusu ve srovnání s pozitivním IgHV mutačním statusem, i když tento rozdíl nebyl potvrzen jako statisticky významný (pro Vδ1+ p = 0,1096; pro Vδ2+ p = 0,0703). Tento výsledek pravděpodobně odráží zvýšenou reaktivitu γδ T-lymfocytů vůči rychle proliferujícím maligním B-lymfocytům. Dále byl zpozorován trend snížení Vδ2+ subpopulace u obou mutačních statusů a mírné zvýšení Vδ1+ subpopulace ve srovnání s hodnotami zdravých dárců, avšak bez statistického potvrzení významnosti rozdílu.

Abstract:

Chronic lymphocytic leukemia is the most commonly occurring hematooncological disease in adulthood. The most common occurrence areas are Western Europe and North America. It is a disease that manifests clinically in the late stages, with a worse prognosis. In addition, CLL has the highest incidence of about 70 years of age, which also greatly complicates chemoimmunotherapy procedures. Therefore, in recent years, efforts have been made to provide cellular immunological therapy to prevent chemotherapy problems. In this cell therapy, the major actors are modified T-lymphocytes directed against malignant B-lymphocytes that are served to CLL patients. γδ T-lymphocytes are so-called unconventional T-lymphocytes, forming a minor population of T-lymphocytes that have not been given much attention in the past. However γδ T-lymphocytes are cells capable of responding to a large number of different antigens without the presence of a major histocompatibility systém. There have been studies showing their ability to cytotoxic activity against malignant cells of both solid tumors and haemato-oncological malignancies. There are studies showing an increased representation of especially Vδ1+ subpopulations of γδ T-lymphocytes in CLL patients, suggesting their increased reactivity to malignant CLL cells. These findings make γδ T-lymphocytes possible candidates for application in cellular immunotherapy. In this bachelor thesis, an immunophenotypic analysis of the representation of γδ T-lymphocyte populations in CLL patients and healthy donors was performed. By using flow cytometry, Vδ1+ and Vδ2+ subpopulations were analyzed simultaneously in healthy donors, CLL patients with positive IgHV mutation status and CLL patients with negative IgHV mutation status. There was an increase in the proportion of Vδ1+ and Vδ2+ subpopulations in the negative IgHV mutation status compared to the positive IgHV mutation status, although this difference was not confirmed to be statistically significant (for Vδ1+ p = 0.1096; for Vδ2+ p = 0.0703). This result probably reflects increased γδ T-cell reactivity to rapidly proliferating malignant B cells. Furthermore, there was a trend for a decrease in Vδ2 + subpopulation in both mutational statuses and a slight increase in Vδ1+ subpopulation compared to that of healthy donors, but without statistically confirming the significance of the difference.

Keywords

Chronická lymfocytární leukémie, γδ T-lymfocyty, mutační IgHV status, průtoková cytometrie

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 2. 5. 2019

Thesis defence

• Date of defence: 10. 6. 2019
• Supervisor: Mgr. Andrea Knight, Ph.D.
• Reader: Mgr. Eva Zapletalová

Masaryk University

Faculty of Medicine

Bachelor programme / field:
Specializations in Health Science / Laboratory Assistant