Příprava a validace buněčných systémů pro testování účinků protinádorových léčiv

Martin MOZOLÍK

Bachelor's thesis

Preparation and validation of cell systems for testing the effects of anticancer drugs

Anotácia:

Genetická modifikace nádorových buněčných linií pomocí fúzních genů slouží jako účinný nástroj pro studium dějů in vivo téměř v reálném čase. Takto upravené buněčné linie se hojně využívají ve výzkumu při hledání mechanismu účinku současných i zcela nově objevených protinádorových léčiv jako jsou například cytostatika, alkylační látky, mitotické jedy nebo antimetabolity a to hlavně metodou High-content screening. Pokrok v oblasti automatizované zobrazovací mikroskopie umožňuje rychlé získání velkoplošných dat ze složitých biologických vzorků. Současné technologie High-content screeningu umožňují kvantifikaci mnohých důležitých údajů opisujících polohu, velikost, tvar, povrch a intenzitu fluorescence značených buněčných organel, jako i zobrazení celého životního cyklu buňky od rozdělení po apoptózu. V této práci se zabývám transfekcí modelových nádorových linií různého histologického původu (U2OS, HCT-116, A549) a optimalizací transfekčních metod s cílem připravit klony stabilních transfektantů. Pro genetickou modifikaci zvolených buněčných linií byly použity běžně komerčně dostupné plazmidy nesoucí geny pro strukturní proteiny (aktin, tubulin) a kaspasu-3 fúzované s reportérovými geny pro zelený (GFP) nebo červený (RFP) fluorescenční protein. Selekce buněk exprimujících plazmidy byla prováděna chemickou cestou s využitím antibiotika Geneticinu (G418) nebo pomocí sortovacího modulu průtokového cytometru.

Abstract:

Genetic modification of cancer cell lines by using the fusion genes serves as a powerful tool for studying in vivo processes in allmost real time. Such modified cell lines are widely used in research to find out the mechanism of action of current and newly discovered anti-cancer drugs such as antineoplastic agents, alkylating agents, antimetabolites and mitotic poisons, by highcontent screening especially. The advances in automated imaging microscopy allows us quickly obtain large-scale data from complex biological samples. Current technologies of high-content screening allow to quantify many important data about location, size, shape, surfaand intensity of fluorescence-labeled cell organelles, as well as the picture of the entire life cycle of cells from division to apoptosis. In this thesis I deal with transfection of model cancer cell lines of different histological origin lines (U2OS, HCT-116, A549) and optimization of transfection methods to prepare stable clones of transfectants. For genetic modification of selected cell lines were used commercially available plasmids carrying the genes for structural proteins (actin, tubulin) and caspase-3, fused with reporter genes for green (GFP) or red (RFP) fluorescent protein. Selection of cells expressing plasmids was carried out chemically, using the antibiotic Geneticin (G418) or throw the sorting equipment of flow cytometer.

Kľúčové slová

transfekce, plazmid, nádorová buněčná linie, reportérové a fúzní geny, fluorescenční protein, High-content screening

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 29. 4. 2011

Identifikátor: 160652

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: Mgr. Ivo Frydrych, Ph.D.

PALACKÝ UNIVERSITY IN OLOMOUC

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Chemistry / Bioorganic Chemistry