Úloha histondeacetylas v odpovědích rostlin na mikrobiální elicitory

Bc. Martina JANKŮ

Master's thesis

Role of histondeacetylases in plant responses to microbial elicitors

Abstract:

Teoretická část práce byla věnována hostondeacetylasam typu HD-tuinů a elicitorům se zaměřením na kryptogein. Cíli experimentální části práce byla nejprve optimalizace metod pro stanovení aktivity HDAC typu 2 a jejich detekci v rostlinném materiálu pomocí Western blotu. Pro stanovení aktivity HDAC byla zavedena v závislosti na typu vzorku metoda fluorimetrická a spektrofotometrická. Metodou Western blot byly v jaderných extraktech tabáku detekovány potenciální tabákové HD-tuiny. Poté bylo zkoumáno zapojení HDAC v mechanismu buněčné smrti u buněčné kultury a listů tabáku po aplikaci kryptogeinu. Rovněž byla věnována pozornost funkci HDAC během regenerace protoplastů tabáku. U listů tabáku po aplikaci kryptogeinu bylo pozorováno snížení enzymové aktivity HDAC, u tabákových buněk po vztažení na jejich životnost během prvních 4 hodin od aplikace byl sledován nárůst aktivity HDAC, po 24 hodinách pokles. Během regenerace protoplastů byly pozorovány změny aktivity HDAC a vliv trichostatinu A, inhibitoru HDAC, naznačující významnou roli HDAC během daného procesu. Předložená diplomová práce tak napomáhá k objasnění zapojení a významnosti této skupiny enzymů v mechanismech buněčné smrti a regeneračních procesů u rostlin.

Abstract:

Theoretical part of thesis was focused on plant family of histone deacetylases and elicitors. The aims of experimental part of this thesis included optimalization of methods of HDAC activity measurement and their detection in plant s material by Western blot. Fluorimetric and spectrofotometric assays for HDAC activity were established depending on the type of samples. Potential tobacco HD-tuins were detected in nuclei extracts by Western blot analysis. Thereafter HDACs were tested during cell death mechanisms in tobacco cell suspensions and leaves after cryptogein treatments. Functions of HDACs during protoplast regenerations were also examined. Measurements of HDAC activities in tobacco leaves showed decreased HDAC activity after cryptogein treatment. HDAC activity in tobacco cells was increased during four hours after cryptogein treatment, whereas detected HDAC activity after 24 hours was decreased. HDAC activity was also correlated to the viabillity of cells. During regeneration of protoplasts changes in HDAC activity were observed. Influence of trichostatin A, an inhibitor of HDACs, was also tested. Probably functions of HDAC during the proces of regeneration have been highlighted. The results of this thesis contribute to explain involvement and important role of enzymes from HDAC family in the mechanisms of cell death and regeneration processes in plants.

Keywords

histondeacetylasy, HD-tuiny, elicitory, kryptogein, N. tabacum cv. Xanthi, životnost buněk, protoplasty

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 25. 4. 2016

Accessible from:: 25. 4. 2016

Thesis defence

• Supervisor: doc. Mgr. Marek Petřivalský, Dr.

PALACKÝ UNIVERSITY OLOMOUC

Faculty of Science

Master programme / field:
Biochemistry / Biochemistry