Vliv přídavku semenné plazmy na kvalitu kryokonzervovaných hřebčích spermií

Bc. Tereza Chrbolková

Diplomová práce

Influence of seminal plasma addition on quality of cryopreserved stallion´s sperms

Anotace:

Cílem práce bylo ověřit hypotézu, že přídavek semenné plazmy zlepší kvalitu rozmražených hřebčích spermií. Odebraný ejakulát byl zředěn laktózo-EDTA-žloutkovým ředidlem. Konečná koncentrace spermií byla 350 x 106 progresivně pohyblivých spermií v inseminační dávce (n = 41). Následně byly inseminační dávky (ID) plněny do 5 ml aluminiových tub, ve kterých byly zmraženy v tekutém dusíku. Po rozmražení (37 ⁰C/30-60 s) byly rozděleny do třech alikvot. Jedna alikvota zůstala jako kontrolní a obsahovala pouze naředěné spermie fyziologickým roztokem. K semenné alikvotě byla přidána semenná plazma (průměrně mrazitelný hřebec) (33,3 % v/v.). K supersemenné alikvotě se vložila taktéž semenná plazma (velmi dobře mrazitelného hřebce) (33,3 % v/v). Alikvoty pocházely od špatně mrazitelných hřebců. U všech experimentálních skupin byla hodnocena motilita pomocí systému CASA, integrita plazmatické membrány (HOS test) a viabilita (eosin/nigrosin) a to v čase T0 – čas po 5 minutách (rozplavání spermií) a v čase T30 (30 minut/37 ⁰C).Nebyl prokázán statisticky významný rozdíl po přidání semenné i supersemenné plazmy na motilitu spermií po 30 minutách inkubace. Většina kinematických parametrů, kromě VCL, se signifikantně zvýšila, po přidání semenné a supersemenné plazmy. Na subpopulace spermií mělo významný vliv přidání semenné a supersemenné plazmy jelikož došlo k procentuálnímu zvýšení rychlých spermií, oproti kontrole po 30 minutách inkubace (p<0,05). Byl prokázán statisticky významný rozdíl (p<0,05) ovlivňující integritu plazmatické membrány, která se po přidání semenné plazmy, signifikantně snížila. Přidání supersemenné plazmy se neprojevilo na procentuálním zastoupení spermií s neporušenou membránovou integritou. Na viabilitu rozmražených hřebčích spermií se vliv semenné a supersemenné plazmy neprojevil.Z této práce je patrný vliv semenné a supersemenné plazmy na rozmražené spermie špatně mrazitelného hřebce. Po přidání semenné plazmy, ať už od průměrně nebo velmi dobře mrazitelných hřebců, k rozmraženým spermiím, došlo k změně distribuce subpopulací, ve prospěch procentuálního zastoupení spermií v rychlé subpopulaci, a proto lze přídavek semenné plazmy doporučit.

Abstract:

The aim of this study was to verify the hypothesis that an addition of seminal plasma improves the quality of post-thawed stallion sperm.Collected ejaculates were diluted with lactose-EDTA-egg yolk extender. Final sperm concentration was 350 x 106 progressively motile sperm per insemination dose (n = 41). Then the insemination dose (ID) were loaded into 5 ml aluminum tubes and frozen in liquid nitrogen. The ID were divided into tree aliquots after thawing (37 ⁰C / 30-60 s). One aliquot remained as a control and contained only diluted sperm with physiological solution. We added seminal plasma (average stallion freeting) to the seminal aliqout (33⁰ C / v/v). We added superseminal plasma (very good for freezing stallion) to the superseminal aliquot (33 ⁰C / v/v). The aliquots were from poor freezer stallions. For all experimental groups were evaluated for the sperm motility (CASA), membrane integrity (HOS test) and viability (eosin/nigrosin) at time T0 – 5 minutes after thawing, and T30 (30 minutes/37 ⁰C).There was not statistically significant diference between casual specimens and those after addition of seminal and superseminal plasma on motility after 30 minutes incubation. Most kinematic parameters, except for VCL, significant increased after addition of seminal and superseminal plasma. The addition of seminal and superseminal plasma had a significant effect on sperm subpopulation, because the percentage of fast sperm counts increased compared to the controles, after 30 minutes incubation (p<0,05). A statistically significant difference was found in the integrity of the plasma membrane that significantly decreased after the addition of the seminal plasma (p <0,05). The addition of superseminal plasma, the percentage of sperm with inactive membrane integrity did not appear. The viability, after addition of seminal and superseminal plasma, to post-thawed stallions sperms, was not affected by the addition of seminal or superseminal plasma.This work shows the influence of seminal and superseminal plasma on post-thawed sperm of poor-for-freezing stallions. After the addition of seminal plasma, no matter if from an average or very well-freezing type of stallions to thawed sperm, the distribution of subpopulations has changed, favoring the percentage of sperm in fast subpopulation, and therefore the addition of seed plasma may be recommended.

Klíčová slova

hřebec, spermie, kryokonzervace, vliv, semenná plazma

Keywords

sperm, cryopreservation, influence, seminal plasma, stallion

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 13. 4. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Ing. Jiří Šichtař, Ph.D.

Česká zemědělská univerzita v Praze

Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Magisterský studijní program / obor:
Biotechnologie / Reprodukční biotechnologie