Laktózová intolerance a její genetická vyšetření

Nikola VYHLÍDALOVÁ

Bachelor's thesis

Lactose intolerance and genetic testing

Abstract:

Intolerance laktózy bývá jednou z nejčastějších příčin zdravotních problémů souvisejících s konzumací mléka. Základní příčinou této malabsorpce je nedostatečná tvorba enzymu laktáza v tenkém střevě, což vede k neschopnosti štěpit mléčný cukr, tedy laktózu. Nedostatečná tvorba laktázy může být geneticky podmíněná. V Evropské populaci byly nalezeny dva jednonukleotidové polymorfismy odpovědné za přetrvávání laktázové aktivity v dospělosti. Cílem bakalářské práce bylo vyšetření těchto dvou polymorfismů dvěma molekulárně biologickými metodami a jejich vzájemné srovnání. Konkrétně se jednalo o techniku reverzní hybridizace na stripech a metodu PCR-RFLP. V teoretické části práce je charakterizována laktózová intolerance, popsána je například základní patofyziologie, typy hypolaktázie, mechanismus a hypotézy vzniku laktózové intolerance. Také je zde uvedena genetická podstata vzniku hypolaktázie. Součástí teoretické části jsou i možnosti diagnostiky laktózové intolerance. V praktické části jsou zpracovány vlastní výsledky práce. Vyšetřovaný soubor tvořilo 20 vzorků získaných od dobrovolníků s podezřením na laktózovou intoleranci. U 39 % vzorků se vyskytoval výsledný genotyp CC/GG, který souvisí s laktózovou intolerancí. Genotyp TT/AA, související s tolerancí laktózy, se ve vyšetřovaném souboru nacházel v 28 %. Heterozygotní genotyp CT/AG se vyskytoval ve 22 %. U zbylých 11 % byly prokázány jiné varianty. Pro stanovení diagnózy laktózové intolerance jsou vhodné obě z použitých metod. Ačkoliv metoda reverzní hybridizace není standardně využívána pro stanovení diagnózy hypolaktázie, osvědčila se jako spolehlivější. Výsledky získané touto technikou vycházely přesněji než rutinně využívanou metodou PCR-RFLP.

Abstract:

Lactose intolerance tends to be one of the most frequent health conditions related to the intake of milk. The essential cause of this malabsorption is the inadequate production of the lactase enzyme by the small intestine, which leads to the inability to break down the disaccharide contained in milk lactose. The inadequate production of lactase may be conditioned genetically. Two single nukleotide polymorphisms were found in the European population that are responsible for the retention of lactase aktivity through adulthood. The aim of the thesis was to use the methods of molecular biology to assess and compare the two polymorphisms. Specifically, the two methods were reverse hybridization on strips and PCR-RFLP method. The thoretical part characterizes lactose intolerance, which includes the description of basic pathophysiology, the types of hypolactasia, the mechanisms of and hypotheses related to acquiring lactose intolerance. The empirical part presents the results of the study. The studied population consisted of 20 samples obtained from volunteers with suspected lactose intolerance. The CC/GG genotype, which is connected to lactose intolerance, was found in 39 % of the population. The TT/AA genotype, connected to lactose tolerance, was found in 28 % of the samples. The heterozygote genotype CT/AG was identified in 22 % and other variants were found in the remaining 11 % of the population. Both methods are appropriate for the assessment of lactose intolerance. Although the method of reverse hybridization is not commonly used for the diagnosis of hypolactasia, it proved to be more reliable. The results obtained by this technique were more consistent than results arrived at by the commonly used PCR-RFLP method.

Keywords

Laktózová intolerance, polymorfismy C/T 13.910 a G/A 22.018, PCR-RFLP, reverzní hybridizace na stripech

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 3. 5. 2018

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Tomáš Nix, Ph.D.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Sciences

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Health Technician