Sledování mínimální zbytkové choroby u pacientů s akutní myeloidní leukémií

Mgr. Vlasta Čejnová

Master's thesis

Abstract:

Akutní myeloidní leukémie (AML) představují skupinu maligních hematologických onemocnění, sestávající z řady podskupin s různým klinickým i laboratorním nálezem, prognózou a odpovědí na terapii. Fúzní geny, které jsou výsledkem chromozomálních abnormalit zodpovědných za vznik některých subtypů leukémií, jsou označovány jako molekulární markery. Tyto diagnosticky významné geny se vyskytují přibližně u 30% pacientů s AML a jsou vhodné pro dlouhodobé sledování minimální zbytkové choroby, tedy populace leukemických buněk, která již není detekovatelná morfologicky. V současnosti je nejčastěji používanou metodou pro detekci zbytkové choroby u leukémií na molekulární úrovni kvantitativní real-time RT-PCR (RQ RT-PCR). Zbytkové onemocnění je určováno na základě detekce a následné kvantifikace exprese molekulárního markeru AML. Pro detekci fúzních genů u AML pacientů jsem používala RNA izolovanou z leukocytů BM nebo PB, kterou jsem amplifikovala pomocí RT-PCR metod. Zbytkovou chorobu jsem u pacientů s AML monitorovala pomocí metody RQ RT-PCR. U fúzních genů s genem MLL jsem provedla sekvenaci. Fúzní gen jsem identifikovala u 26 dospělých pacientů s AML. Jednalo se : 9x o fúzní gen PML/RARa, 8x o fúzní transkript AML1/ETO, 3x o fúzní gen CBFb/MYH11 a 6x o MLL fúzní transkripty. U 15 pacientů , u kterých byla dlouhodobě monitorována zbytková choroba metodou RQ RT-PCR, jsem v 8 případech zaznamenala molekulární relaps. Z této skupiny sledovaných pacientů je nyní 10 pacientů v remisi onemocnění. Z výsledků diplomové práce je zřejmé, že na základě monitorování dynamiky zbytkového onemocnění u jednotlivých pacientů je možné předpovědět riziko relapsu a zahájit záchrannou léčbu.

Abstract:

Acute myeloid leukemias (AML) are heterogenous group of malignant hematological disorders, consisting of a number of subgroups with various clinical and laboratory findings, prognosis and response to a therapy. Fusion genes, they originate in chromosomal abnormalities responsible for the development of some leukemia subtypes, are called molecular markers suitable for the long-term monitoring of minimal residual disease the leukemic population undetectable by morphologic methods. Currently, the most frequent method used for the detection of residual disease in leukemias is real-time quantitative RT-PCR (RQ RT-PCR). Residual disease is determined based on quantification of AML molecular marker expression. I used RNA isolated from BM or PB leukocytes for the detection of fusion genes in AML patients. RNA was amplified by RT-PCR methods. I used RQ RT-PCR method for the long-term monitoring of minimal residual disease in patients with AML. Fusion genes including MLL gene were sequenced. I identified fusion gene in 26 adult AML patients. It was: 9x fusion gene PML/RARa, 8x fusion transcript AML1/ETO, 3x fusion gene CBFb/MYH11 and 6x MLL fusion transcripts. In 15 AML patients, which were in the long-term monitoring of residual disease by RQ RT-PCR method, I detected molecular relaps in 8 cases. 10 patietns of this group in the long-term monitoring achieved remission after treatment. Based on the results of this diploma thesis, I can demostrate an effective using of RQ RT-PCR method as a predictor of the molecular relaps and as the assesment tool for treatment options in individual patients.

Keywords

acute myeloid leukemia (akutní myeloidní leukémie, AML), fusion genes (fúzní geny), minimal residual disease (minimální zbytková choroba), real-time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (real-time kvantitativní reverzně transkripční polymerázová řetězová reakce, RQ RT-PCR)

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 16. 2. 2006

Thesis defence

• Date of defence: 15. 2. 2006
• Supervisor: Mgr. Jitka Berkovcová, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Biology / Molecular Biology and Genetics