Telomerový protein TPP1 - jeho interakce při ochraně konců lidských chromosomů

Bc. Michaela Kerberová

Bakalářská práce

Telomeric protein TPP1 - its interactions protecting human chromosome ends

Anotace:

Cílem této bakalářské práce je studium interakcí lidského telomerového proteinu TPP1, potažmo jeho vazebných domén s dalšími proteiny shelterinu a interakční doménou telomerázy. Interakce byly zkoumány pomocí metod biochemických i molekulárně biologických. Pro přípravu rekombinantních proteinů TPP1 a TIN2 v bakteriálních expresních systémech bylo využito klonování. Pro následnou kopurifikaci proteinů TPP1 a TIN2 byly využity chromatografické metody. Vazba mezi TPP1 a interakční doménou telomerázy byla popsána za použití fluorescenční anizotropie. Byly kvantifikovány interakce celodélkového proteinu TPP1, zkrácené varianty TPP1 postrádající 87 aminokyselin na N konci a samotné interakční OB domény proteinu TPP1 s interakční TEN doménou telomerázy. V rámci práce byla také charakterizována lokalizace interakčních partnerů TPP1 – TIN2 a POT1 – za použití fluorescenční mikroskopie. Připravené proteiny a získané poznatky budou využity při dalším studiu shelterinového komplexu jakožto klíčového nukleoproteinového komplexu chránícího lidské telomery.

Abstract:

The objective of this bachelor thesis is to study interactions of human telomeric protein TPP1, specifically, its interacting domains with other shelterin proteins and the interacting domain of telomerase. The interactions were investigated by biochemical and molecular biological methods. Cloning was used for the preparation of recombinant proteins TPP1 and TIN2 in bacterial expression systems. Chromatographic methods were used for the copurification of TPP1 and TIN2. The binding affinity between TPP1 and telomerase was described by fluorescence anisotropy. The interactions of full-length protein TPP1, truncated variants of TPP1 (lacking 87 amino acids at the N-terminus) and interaction OB domain of TPP1 with TEN domain of telomerase were quantified. The localization of TIN2 and POT1, as interaction partners of TPP1, was characterized using fluorescence microscopy. The prepared proteins and acquired new findings will be used in further studies of shelterin as an essential nucleoprotein complex protecting human telomeres.

Klíčová slova

telomery, telomeráza, shelterin, TPP1, TIN2, POT1, purifikace, fluorescenční, telomeres, telomerase, purification, fluorescence

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 16. 5. 2019

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 11. 6. 2019
• Vedoucí: doc. Mgr. Ctirad Hofr, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Aplikovaná biochemie / Aplikovaná biochemie