Srovnání produkce rekombinantních proteinů v klasickém a autoindukčním mediu

Mgr. Michaela Dyčková

Bachelor's thesis

Comparison of recombinant protein production using classical and autoinduction media

Anotácia:

Autoindukce je založena na základě schopnosti některých medií vyvolat expresi rekombinantních proteinů v E. coli. Induktorem je 1,6-allolaktosa, izomer laktosy, která je přítomna v mediu. Na rozdíl od klasických neindukčních medií není nutno přidávání IPTG či jiného induktoru, který je pro buňku často toxický. Autoindukce je přirozený proces kontrolovaný buňkami. Umožňuje pokračování jejich růstu i po indukci a nezatěžuje metabolismus. Také může napomoci sbalování některých proteinů. Proteiny testované v této práci byly vybrány z modelových organismů napadajících pacienty s cystickou fibrosou a podílejících se na vzniku aspergillosy. Byla testována jejich exprese v běžném neindukčním mediu, kde docházelo k jejich produkci do nerozpustné fáze. Cílem bylo zjistit, zda proces autoindukce těmto proteinům napomůže k expresi do rozpustné fáze. Proteiny by pak bylo možno lépe zkoumat a objasnit procesy, kterými ovlivňují výše zmíněná onemocnění.

Abstract:

The autoinduction is a process based on the ability of some growth media to induce the expression of recombinant proteins in E. coli. There is an inductor 1,6-allolactose, isomeric structure of lactose, present in the medium. In contrast to non-induction media there is no need to add IPTG or other inductor, which is often toxic to the cell. Autoinduction is a natural process controlled by cellular life cycle. The cells are able to grow even after the induction and their metabolism is not overrun by induction. It can also help the folding of some proteins. The proteins tested in this study were selected from model organisms invading patients with cystic fibrosis and those involved in the development of aspergillosis. Their expression in non-induction medium, which lead to their production into the insoluble phase, was tested. The aim of the study was to find out whether it would be possible to modify their expression to the soluble phase by the autoinduction. That would lead to the possibility of easier studying the proteins and better understanding the processes of the influence on the illnesses stated before.

Kľúčové slová

LB medium, IPTG, autoindukce, autoinduction, lektiny, lectins, cystická fibrosa, cystic fibrosis, cftr, aspergillosa, aspergillosis

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 11. 5. 2012

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 18. 6. 2012
• Vedúci: prof. RNDr. Michaela Wimmerová, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Biochemistry / Biochemistry