Stanovení bakterie Bacillus subtilis pomocí imunosensorů s nanočásticemi

Bc. Renata Šromová

Master's thesis

Detection of the bacterium Bacillus subtilis using immunosensors with nanoparticles

Abstract:

Pro detekci spor bakterie Bacillus atrophaeus byl vytvořen imunosensor s kovalentně vázanou protilátkou. Jako podkladový materiál pro konstrukci daného sensoru bylo využito křemenné sklo a křemíkové čipy s napařenou vrstvou zlata. Zachycené spory byly zobrazeny pomocí mikroskopie atomových sil a s využitím světelného/fluorescenčního mikroskopu. Pro lepší detekci byly zachycené spory dále značeny. S využitím fluorescenčního mikroskopu bylo pozorováno navázání konjugátu fluorescein isothiokyanátu a protilátky Bacillus spores na zachycené spory. Pomocí fluorescence byla také pozorována vazba kvantových teček, která probíhala přes interakci biotinu a avidinu. Spory značené zlatými nanočásticemi byly pozorovány světelným mikroskopem. Protože rozlišení světelného mikroskopu neumožňuje pozorování zlatých nanočástic přímo, bylo k zesílení jejich signálu využito depozice stříbra.

Abstract:

For the detection of bacterial spores of Bacillus atrophaeus the imunosensing surfaces were developed using covalently coupled antibodies. Quartz glass and silicon chips with sputterred layer of gold were used as background materials for the construction of the sensor. The detected spores were shown using atomic force microscopy and light/fluorescence microscope. For a better detection, the found differences were also marked. Using fluorescent microscopy, binding of the conjugate of the fluoresceinisothiocyanate and antibody anti Bacillus spores to the captured spores was studied. As an alternative fluorophore, quantum dots were used together with antibody coupled using the biotin / avidin pair. the spores labeled with gold nanoparticles were observed in light microscope. As resolution of light microscopy does not allow direct observation of gold nanoparticles, silver deposition has been used to strengthen the signals.

Keywords

Bacillus atrophaeus, imunosensor, kvantové tečky, zlaté nanočástice

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 13. 5. 2011

Thesis defence

• Date of defence: 6. 6. 2011
• Supervisor: doc. RNDr. Petr Skládal, CSc.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Biochemistry / Analytical Biochemistry