Porovnání proliferačního testu inkorporace thymidinu s cytometrickým měřením redistribuce intracelulárně vázaného fluorochromu CSFE (carboxyfluorescein succinimidyl) u T lymfocytů

Bc. Adéla Motyčková

Bachelor's thesis

Comparison of lymphocyte proliferation test by thymidine incorporation with flow cytometry determination of intracellular fluorescent dye CFSE (carboxyfluorescein succinimidyl) in T-lymphocytes

Abstract:

Práce poskytuje komplexní náhled do problematiky proliferačních testů, jež jsou řazeny mezi specializovaná funkční vyšetření v imunologické laboratoři. Práce je především zaměřena na porovnání klasické metody inkorporace radioaktivně značeného thymidinu do DNA dělících se buněk s neradioaktivní metodou cytometrického měření redistribuce intracelulárně vázaného fluorochromu CFSE (karboxyfluorescein succinimidyl ester). Jako standard při vyšetření blastické transformace lymfocytů se již několik desítek let používá radioaktivní metoda inkorporace značeného thymidinu a to především z důvodu své vysoké citlivosti. S rozvojem průtokové cytometrie se v posledních letech začala sledovat proliferační aktivita buněk i jinými technikami, mezi jinými i právě barvením pomocí fluorochromu CFSE. Tato nově využívaná neradioaktivní metoda umožňuje dlouhodobě sledovat dynamiku buněčného dělení, neboť každá další populace dceřiných buněk obsahuje poloviční množství barviva, což se projeví snížením intenzity měřené fluorescence. Hlavní výhodou stanovení proliferační aktivity buněk pomocí průtokové cytometrie je možnost sledování počtu buněčných dělení a životaschopných buněk v čase. V současné době jsou vypracovávány další neradioaktivní metody jako alternativy klasické thymidinové metody.

Abstract:

The work provides a comprehensive insight into the proliferation assays, which are classified as specialized functional tests in the immunological laboratory. The work is mainly focused on comparing the classical methods of incorporation of radiolabelled thymidine into DNA of dividing cells with non-radioactive method measurement of intracellular redistribution of bound fluorochrome CFSE (carboxyfluorescein succinimidyl ester) by means of flow cytometry. As standard in the examination of blast transformation of lymphocytes for several decades radioactive labeled thymidine incorporation method is used because of its high sensitivity. Development of flow cytometry field in recent years provide possibility among others also to monitor the proliferative activity of cells by staining with fluorochrome CFSE. This new usage of non-radioactive method allows monitoring of long-term dynamics of cell division, because every other population of daughter cells contains half the amount of the dye, thereby reducing the intensity of the measured fluorescence. The main advantage of the proliferative activity of cells by flow cytometry is the ability to track the number of cell divisions in time and extent of viable cells. Currently more non radioactive methods as alternatives to classical thymidine method are developed.

Keywords

CFSE, inkorporace thymidinu, proliferační test, průtoková cytometrie, T lymfocyt

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 30. 4. 2014

Thesis defence

• Date of defence: 10. 6. 2014
• Supervisor: Mgr. Olga Tichá, Ph.D.
• Reader: prof. MUDr. Vojtěch Thon, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Medicine

Bachelor programme / field:
Specializations in Health Science / Laboratory Assistant