Chemosenzitivizace lymfoidních buněk s defekty v genu TP53 prostřednictvím inhibice proteinu Chk1

Mgr. Jana Zemanová, Ph.D.

Doctoral thesis

Chemosensitization of lymphoid cells with TP53 gene defects through the inhibition of Chk1 protein

Anotácia:

Léčebné možnosti pro pacienty s lymfoidními tumory nesoucími defekty v genu TP53 jsou velmi omezené. Abnormality TP53 vedou ke ztrátě funkce klíčového protinádorového proteinu p53, což výrazně ztěžuje nebo rovnou znemožňuje (dle typu defektu) fungování léčebných režimů založených na indukci apoptózy po poškození DNA. Předmětem doktorského projektu bude testovat potenciál inhibice proteinu checkpoint kinase 1 (Chk1) pro zvýšení účinnosti vybraných nukleosidových analogů (NAs) vůči B-lymfoidním nádorovým buňkám. Práce bude studovat dopad inhibice Chk1 - jak samostatně, tak zejména v kombinaci s NAs - na následující parametry: (a) poškození DNA a její opravu (b) indukci apoptózy a profil buněčného cyklu (c) mechanismus účinku vzhledem ke statutu genu TP53; všechny klíčové experimenty budou prováděny a porovnávány u buněčných linií s funkčním a mutovaným proteinem p53. Práce bude metodicky zahrnovat zejména měření buněčné viability pomocí metabolického testu Wst-1, analýzu apoptózy a buněčného cyklu pomocí flow-cytometrie, a dále analýzy vybraných proteinů a genů pomocí western blotů a metodiky real time PCR.

Abstract:

Treatment options for patients with TP53-defective lymphoid tumors are very limited. Abnormalities in TP53 gene lead to a dysfunction of a key tumor-suppressor protein, i.e. p53, which significantly aggravates or even prevents (according to the type of defect) functioning of therapeutic regimens based on apoptosis induction after DNA damage. The aim of the thesis is to test a potential of checkpoint kinase 1 (CHK1) inhibition in B-lymphoid cells to improve the effectiveness of nucleoside analogs (NAs). The work will study the effects of CHK1 inhibition - both individually and particularly in combination with NAs - on the following parameters: (a) DNA damage and its repair (b) apoptosis induction and cell cycle profile (c) mechanism of action with respect to the TP53 mutational status. All principal experiments will be performed and compared in cell lines possessing functional and mutated p53 protein. Methodically, the thesis will include cell viability measurement using a metabolic WST-1 assay, analysis of apoptosis and cell cycle by flow cytometry, and complementary analyses of selected proteins and genes using western blot and real time PCR.

Kľúčové slová

Checkpoint kináza 1 / Chk1, SCH900776, nukleosidová analoga, TP53, lymfoidní malignity

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 6. 1. 2017

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 26. 5. 2017
• Vedúci: doc. Mgr. Martin Trbušek, Dr.

Masaryk University

Faculty of Medicine

Doctoral programme / odbor:
Oncology (4-years) / Oncology