Porovnání metod izolace DNA

Kristýna ŠESTÁKOVÁ

Bachelor's thesis

Comparison of DNA isolation methods

Abstract:

Izolace DNA je v genetických laboratořích stěžejní. Bývá první metodou k dalším postupům, které vedou k zisku informací o DNA. Nároky na izolační metody jsou vysoké. Díky podobnosti DNA s jinými biopolymery musí metoda vykazovat vysokou selektivitu a díky nevelkému obsahu DNA v biologickém materiálu i senzitivitu. Vstupním vzorkem z klinické praxe bývá nejčastěji lidská krev a v ní obsažené jaderné buňky. V této práci je popsáno, proč je právě krev nejčastěji používána. Ze získané krve dobrovolníků byla DNA izolována čtyřmi metodami: vysolovací, založenou na změně rozpustnosti DNA v závislosti na změně koncentrace iontů v roztoku; fenol-chloroformovou extrakcí, která patří k nejlevnějším a nejstarším metodám; dále pomocí komerčně vyráběného kitu, rychlá a jednoduchá metoda využívající navázání DNA na silikátový povrch; a izolaci pomocí automatického přístroje, separujícího pomocí magnetických částic (Anzenbacher a Kovář, 1986). Každá z metod má své výhody i nevýhody a její výběr je závislý na dalším nakládání s DNA. K nejčastějším kritériím při zvolení izolační metody jsou časová náročnost metody, cena metody, výtěžek a čistota DNA. V této práci jsou tyto požadavky porovnávány mezi zmíněnými metodami.

Abstract:

Isolating DNA is crucial in genetic laboratories. I tis the first method of further steps to obtain DNA information. The isolation method requirements are high, Due to the similarity of DNA to other biopolymers, the method must exhibit high selectivity and also sensitivity due to the low DNA content of the biological material. The input sample from clinical practice is usually human blood and nuclear cells contained in it. This thesis describes why blood is most commonly used. From the volunteer blood obtained, DNA was isolated by four methods: salting out, based on a change in DNA solubility depending on the change in ion concentration in the solution; phenol-chloroform extraction, which is one of the cheapest and oldest methods; in addition, using a commercially available kit, a fast and simple method using DNA binding to a silicate surface; and isolating with an automated magnetic particle separator (Anzenbacher and Kovář, 1986). Each method has its advantages and disadvantages and its choice depends on the further handling of DNA. The most common criteria for choosing an isolation method is its time-consuming , the cost of the method, the yield and the purity of the DNA. In this thesis these requirements are compared amongst methods.

Keywords

Deoxyribonukleová kyselina, Ribonukleová kyselina, izolační metody

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 3. 5. 2019

Thesis defence

• Supervisor: Ing. Tomáš Nix, Ph.D.

UNIVERSITY OF SOUTH BOHEMIA IN ČESKÉ BUDĚJOVICE

Faculty of Health and Social Sciences

Bachelor programme / field:
Specialization in Health Service / Zdravotní laborant