Profilování oxidačních produktů během diferenciace lidských buněčných linií

Karolína HRABÁKOVÁ

Bachelor's thesis

Profiling of oxidation products during differentiation in human cell lines

Abstract:

U-937 is a promonocytic cell line, which can differentiate when met by a stimulus to macrophages or dendritic cells. During differentiation, reactive oxygen species are formed as a by-product. In this bachelor thesis, my aim was to understand whether the formed reactive oxygen species damage the differentiated cells. Confocal laser scanning microscopy (CLSM) and western blotting (specifically immunoblotting) using anti-MDA and anti-NOX4 antibodies were used for the experiments. Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) was used as the differentiation agent. In this study and based on results reported in the thesis, we conclude that the differentiation process was a dose-dependent process and high concentration is coupled with cell apoptosis in addition to differentiation. From the confocal images and western blotting analyses, it can be concluded that despite differentiation in cells, both the expression of NOX4 and the oxidized NOX4 subunit in the cytoplasm is higher with increasing concentration of PMA.

Abstract:

U-937 je promonocytická buněčná linie, která se pomocí stimulu dále může diferenciovat na makrofágy nebo dendritické buňky. Při diferenciaci se jako vedlejší produkt tvoří reaktivní formy kyslíku. V této bakalářské práci se snažím zjistit, jestli vytvořené reaktivní formy kyslíku při diferenciaci buňky poškozují. Pro experimenty byly použity metody konfokální laserové skenovací mikroskopie (CLSM) a western blotting (specificky immunoblotting) s anti-MDA a anti-NOX4 protilátkami. Buňky byly diferenciované pomocí forbol-12-myristát-13-acetátu (PMA). V této studii spolu s výsledky této práce bylo zjištěno, že proces diferenciace je závislý na podané dávce látky a vysoká koncentrace PMA je spojená s buněčnou apoptózou spolu s diferenciací. Z konfokálních fotografií a western blotting analýz bylo zjištěno, že i přes diferenciaci je množství exprese NOX4 a množství oxidované NOX4 podjednotky přítomné v cytoplazmě při stoupajících koncentracích PMA vyšší.

Keywords

U-937, reaktivní formy kyslíku, NADPH oxidáza, monocytická diferenciace

Language used: English

Date on which the thesis was submitted / produced: 5. 5. 2023

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Ankush Prasad, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Biology / Molecular and Cell Biology