Vývoj a optimalizace ELISA metody pro stanovení obsahu glykovaného hemoglobinu ve vzorcích krve

Mgr. Radka Obrusníková

Bachelor's thesis

ELISA method for analysis of glycated hemoglobin

Anotácia:

Glykovaný hemoglobin (GHb) je frakcí hemoglobinu, která je charakterizována jako směs neenzymaticky glykovaných molekul hemoglobinu. Frakce označovaná jako HbA1c je tvořena molekulami, které mají glukosu navázanou na beta-terminálním valinu. Obsah glykovaného hemoglobinu vypovídá o střednědobém (v horizontu posledních 3 měsíců) stavu glykemie. Je proto důležitým indikátorem stavu a léčebné terapie diabetu. Analýza GHb je poměrně specifická ve srovnání s jinými analyty stanovovanými v klinické biochemii, specifita je dána právě neenzymatickým způsobem vzniku glykovaného hemoglobinu a také tím, že obsah GHb je vyjadřován jako procento obsahu glykované frakce v celkovém hemoglobinu. Úkolem předkládané bakalářské práce byl vývoj heterogenní imunoafinitní metody (na principu ELISA, Enzyme-linked Immunosorbent Assay) pro stanovení obsahu glykovaného hemoglobinu ve vzorcích krve. V experimentální části byla práce nejdříve zaměřena na přípravné práce – konjugace protilátky s peroxidasou, příprava glykovaného hemoglobinu in-vitro a sledování adsorpce hemoglobinu na povrch ELISA desky. Poté práce pokračovala vývojem, optimalizací a testováním metody ELISA určené pro stanovení glykovaného hemoglobinu.

Abstract:

Glycated hemoglobin (GHb) is a hemoglobin fraction characterized as a mixture of glycated hemoglobin sub-species having non-enzymatic origin. Fraction named HbA1c is composed by hemoglobin molecules glycated in position of beta terminal N Valine. Content of glycated hemoglobin in blood shows level of glycemia during last 3 months. Therefore it is an important marker of diabetes status and compensation. Analysis of glycated hemoglobin is quite different from other analytical methods used in clinical diagnostics. It is caused mainly by the non-enzymatic origin of GHb. Moreover, the GHb content needs to be expressed as the percentage of total hemoglobin content, not as absolute concentration.From the experimental point of view, thesis has been focused on development of ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) method for analysis of glycated hemoglobin. First, preparation steps took a place; i.e. conjugation of antibody with an enzyme, in-vitro glycation and characterization of hemoglobin adsorption. Then the experiments continued, development and testing of ELISA methods for glycated hemoglobin analysis in direct and indirect format was processed.

Kľúčové slová

hemoglobin, glykovaný hemoglobin, ELISA, konjugace, křenová peroxidasa, diabetes mellitus, glykace, IFCC, DCCT, protilátka, glykemie, glukosa, celkový hemoglobin, hematin, latexová aglutinace, kyanomethemoglobin, BSA, kasein, pufry, konjugát, stanovení HbA1c

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 30. 5. 2008

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 26. 6. 2008
• Vedúci: Mgr. Jan Přibyl, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Applied Biochemistry / Applied Biochemistry