Systém FUCCI ako výkonný nástroj na identifikáciu fáz bunkového cyklu

Katarína ŠTOČKOVÁ

Bachelor's thesis

FUCCI system as a powerful tool for the cell cycle phases identification

Anotácia:

Fluorescenčný indikátor bunkového cyklu založený na ubikvitinácii (systém FUCCI) je nástroj používaný na vizualizáciu fáz bunkového cyklu živých buniek v reálnom čase. Metóda je založená na koordinácii Cdt1, ktorého hladina vrcholí počas G1 fázy a prudko klesá v S fáze, a jeho inhibítora geminín, ktorého hladina je vysoká počas G2, vo fázy M klesá. Spojenie fluorescenčných proteínov s Cdt1 a geminínom umožňuje nepretržitú vizualizáciu buniek vo fázach G1, S alebo G2/M bunkového cyklu. Cieľom tejto práce bolo vytvorenie nových transformovaných, reportérových bunkových línii, a to nenádorovej bunkovej línie BJ a nádorovej bunkovej línie HCT-116, na základe lentivírusovej transdukcie. Na týchto líniách bolo testované pôsobenie protinádorových liečiv so známou aktivitou na jednotlivé fázy v bunkovom cykle. Testovanie liečiv bolo prevedené na polyklonálnych a následne monoklonálnych líniách buniek. Celkovo bolo testovaných sedem protinádorových látok pri dvoch rôznych koncentráciách. Vplyv liečiv na bunkový cyklus pri testovaných líniách bol vyhodnotený pomocou obrazovej analýzy, vďaka čomu bolo zistené percentuálne zastúpenie buniek v jednotlivých fázach bunkového cyklu.

Abstract:

The Fluorescence Ubiquitination-based Cell Cycle Indicator (FUCCI system) is a tool used to visualize the cell cycle phases of living cells in real time. The method is based on the coordination of Cdt1, whose level peaks during G1 phase and declines sharply in S phase, and its inhibitor geminin, whose level is high during G2, declines in M phase. The association of fluorescent proteins with Cdt1 and geminin allows continuous visualization of cells in the G1, S, or G2/M phases of the cell cycle. The aim of this work was to establish new transformed, reporter cell lines, namely the non tumor cell line BJ and the tumor cell line HCT-116, based on lentiviral transduction. The action of anticancer drugs with known activity on different phases in the cell cycle was tested in these lines. Drug testing was performed on polyclonal and subsequently monoclonal cell lines. A total of seven anticancer agents were tested at two different concentrations. The effect of the drugs on the cell cycle in the tested lines was evaluated by image analysis, which revealed the percentage of cells in the certain phase of the cell cycle.

Kľúčové slová

apoptóza, bunkový cyklus, cytostatiká, kontrolné body, transdukcia

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 12. 5. 2023

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: Mgr. Alžběta Srovnalová, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Biology / Experimental Biology