Retenční chování trinukleotidů v HPLC

Bc. Jan Fiala

Diplomová práce

Retention behavior of trinucleotides in HPLC

Anotace:

Předložená diplomová práce se zabývá studiem retenčního chování sekvenčních izomerů trinukleotidů v chromatografickém módu kapalinové chromatografie s hydrofilními interakcemi. Snahou této práce je popsat možné typy interakcí, případně retenčních mechanizmů, které mohou významně přispět k pochopení tohoto chromatografického módu. První část této práce je věnována studiu záměny organického modifikátoru, jakožto významnému parametru, ovlivňujícího zásadně vlastnosti mobilní fáze. Vybrané modifikátory (acetonitril, methanol) vykazovaly významnou změnu selektivity studovaných analytů v důsledku rozdílných proton-donorních vlastností. Další část práce se zabývá změnami pH v mobilní fázi a složením mobilní fáze z pohledu směsného rozpouštědla. Tyto experimenty odhalily významné posuny ionizačních rovnovah v systému, které rozhodovaly o přítomnosti iontových forem analytů. Díky těmto experimentům bylo možné posoudit významnost coulombických interakcí analytů s nabitou stacionární fází. Závěr této práce je věnován termodynamické analýze chromatografického systému pomocí van’t Hoffových křivek, které byly použity pro výpočty termodynamických veličin, díky kterým bylo možné částečně posoudit retenční mechanizmus tohoto velmi komplexního separačního módu.

Abstract:

Presented diploma thesis deals with the study of the retention behaviour of sequential isomers of trinucleotides in the chromatographic mode of hydrophilic interaction chromatography. The aim of this work is to describe possible types of interactions, or eventually retention mechanisms, which can significantly contribute to the understanding of this chromatographic mode. The first part of this work is dedicated to the study of the substitution of the organic modifier as an important parameter influencing fundamentally the properties of the mobile phase. Selected modifiers (acetonitrile, methanol) showed a significant change in the selectivity of the analytes studied due to different proton-donor properties. The next part deals with pH changes in the mobile phase and the composition of the mobile phase from the point of view of mixed solvent. These experiments revealed significant shifts in ionization equilibria in the system, which determined the presence of ionic forms of analytes. Thanks to these experiments, it was possible to consider the significance of the coulombic interactions of the analytes with the charged stationary phase. The closing part of this work is focused to the thermodynamic analysis of the chromatographic system using van't Hoff curves, which were used to calculate thermodynamic variables, thanks to which it was possible to partially evaluate the retention mechanism of this very complex separation mode.

Klíčová slova

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie, HPLC, ERLIC, HILIC, sekvemery trinukleotidů, retenční chování, termodynamická analýza, van’t Hoffovy křivky, High performance liquid chromatography, trinucleotides sequemers, retention behaviour, thermodynamics analysis, van’t Hoff curves

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 15. 5. 2017

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 2. 6. 2017
• Vedoucí: Mgr. Miroslava Bittová, Ph.D.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Chemie / Analytická chemie