Vývoj elektrochemického imunosenzoru pro kvantifikaci CA125 biomarkeru ovariálního karcinomu

Bc. Klára Hošková

Diplomová práce

Development of electrochemical immunosensor for quantification of CA125 biomarker of ovarian carcinoma

Anotace:

Diplomová práce se zabývá přípravou sekundárních protilátek značených kvantovými tečkami (konjugát), které jsou využitelné pro kvantitativní elektrochemickou detekci antigenu pomocí imunosenzoru založeném na principu ELISA. Imunosenzor je tvořen primárními anti-CA 125 protilátkami (IgG) imobilizovanými na magnetických částicích, proteinem CA 125 jako antigenem a připravenými sekundárními anti-CA 125 protilátkami (IgG) značenými kvantovými tečkami. Jako kvantové tečky byly použity InP/ZnS QDs. Dílčí kroky spočívaly v optimalizaci postupu přípravy magnetického nosiče (tj. imobilizace antigenu/protilátky), v optimalizaci postupu konjugace protilátek s QDs pro přípravu sekundárních značených protilátek anti-CA 125 IgGInP/ZnS a následném ověření jeho funkčnosti a sestavení kompletního imunosenzoru. Pro elektrochemickou detekci byly využity miniaturizované tištěné tříelektrodové senzory s uhlíkovou pracovní elektrodou se rtuťovým filmem a square-wave anodická rozpouštěcí voltametrie jako detekční technika.

Abstract:

The thesis deals with the preparation of secondary antibodies labeled with quantum dots (conjugate), which are used for quantitative electrochemical detection of an antigen by using immunosensor based on the ELISA. The immunosensor is formed by primary anti-CA 125 antibodies (IgG) immobilized on magnetic particles, protein CA 125 as an antigen and prepared secondary anti-CA 125 antibodies (IgG) labeled with quantum dots. InP/ZnS QDs were used as quantum dots. Substeps consisted in the optimizing procedure for the preparation of magnetic carriers (i. e. immoobilization of antigen/antibodies), in the optimizing procedure of conjugation the antibodies with quantum dots for preparation of labeled secondary antibodies anti-CA 125 IgGInP/ZnS and subsequently for verify its functionality and constructing complete immunosensor. For electrochemical detection the miniaturized three-electrode screen printed sensors with a carbon working electrode with mercury film were used. Square-wave anodic stripping voltammetry was used as a detection technique.

Klíčová slova

ovariální karcinom, CA 125, magnetické částice, kvantové tečky, značené protilátky, elektrochemický imunosenzor

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 12. 5. 2016

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 7. 6. 2016
• Vedoucí: RNDr. Lucie Korecká, Ph.D.

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Speciální chemicko-biologické obory / Analýza biologických materiálů