Kapilární metody pro analýzu peptidů a proteinů

Mgr. Zdeňka Šťastná

Doctoral thesis

Capillary methods for the analysis of peptides and proteins

Abstract:

Disertační práce se zabývá vývojem a využitím kapilárních metod (konkrétně kapilární elektroforézy, kapilární elektrochromatografie a nanokapalinové chromatografie) ke studiu modifikací vznikajících u vybraných bílkovin (konkrétně hovězího sérového albuminu, lidského sérového albuminu, lidského transferinu) v důsledku neenzymatické glykace. V teoretické části jsou shrnuty poznatky o neenzymatické glykaci bílkovin, jejím průběhu, výsledných produktech a významu této reakce pro živý organismus. Dále se věnuje principům kapilární elektroforézy a nanokapalinové chromatografie a jejich využití v proteomice. Experimentální část seznamuje s použitými chemikáliemi, instrumentací, metodami a postupy příprav jednotlivých vzorků používaných pro tyto studie. Výsledky a diskuze shrnují dosažené výsledky a poznatky a jsou rozděleny na 3 části: (i) studium modifikace hovězího sérového albuminu oxo-sloučeninami, (ii) kapilární elektrochromatografie v otevřené kapiláře s navázanými zlatými nanočásticemi, (iii) nové monotopické neenzymatické modifikace vzniklé reakcí albuminu s ribózou.

Abstract:

This thesis deals with the development and utilization of capillary methods (specifically capillary electrophoresis, capillary electrochromatography and nanoliquid chromatography) to study modifications resulting in selected proteins (specifically bovine serum albumin, human serum albumin, human transferrin) due to the non-enzymatic glycation. Knowledge of the non-enzymatic glycation of proteins are summarized in the theoretical part, along with the reaction course, the resulting products and the importance of this reaction to living organisms. It also discusses the principles of capillary electrophoresis and nanoliquid chromatography and their applications in proteomics. Experimental section acquainted with the chemicals used, instrumentation, methods and procedures of preparation of the samples used for these studies. Results and discussion summarize the results and findings and are divided snto 3 parts: (i) the study of modifications of bovine serum albumin by oxo-compounds, (ii) capillary electrochromatography in open tubular capillary coated with gold nanoparticles, (iii) new monotopic non-enzymatic modification formed by the reaction of albumin with ribose.

Keywords

bílkoviny, neenzymatická glykace, konečné produkty glykace, kapilární elektroforéza, kapilární elektrochromatografie, nanokapalinová chromatografie

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 5. 8. 2013

Accessible from:: 31. 12. 2999

Thesis defence

• Date of defence: 16. 9. 2013

University of Pardubice

Faculty of Chemical Technology

Doctoral programme / field:
Analytical Chemistry / Analytical Chemistry