Testování inhibitorů GTPas pro studium endocytózy bionanomateriálů

Bc. Karolína Gráfová

Master's thesis

Testing of GTPase inhibitors for the study of endocytosis of bionanomaterials

Abstract:

Diplomová práce s názvem „Testování inhibitorů GTPas pro studium endocytózy bionanomateriálů“ se v literární části věnuje popisu bionanotransportérů se zaměřením na apoferritin, dále mechanismům buněčné internalizace řízené GTPasami a jejich inhibitory. V experimentální části byla testována účinnost barvení apoferritinu s vyhodnocením Cy2 NHS esteru jako vhodného fluorescenčního barviva pro další ex-perimenty, byla stanovena míra exprese receptorů TfR1 a SCARA5 a otestována toxicita dynaminového inhibitoru dynasore. Dále byla testována inhibice internalizace Cy2 značeného apoferritinu pomocí různých koncentrací dynasoru na pěti buněčných liniích odvozených z prsní tkáně (HBL-100, T-47D, MCF-7, MDA-MB-231 a MDA-MB-468) a na stejných liniích také inhibice internalizace Cy2 APO při společném působení dynasoru, azidu sodného nebo sacharosy. Naměřené výsledky potvrzují inhibici internalizace ať už samotným dynasorem či ve směsi s jinými inhibitory, zároveň však zdůrazňují komplexnost endocytických procesů a nutnost dalšího zkoumání.

Abstract:

Diploma thesis entitled“Testing of GTPase inhibitors for the study of endocytosis of bionanomaterials” is summarizing the importance of bionanotransporters with a special emphasis on apoferritin, characterizes mechanisms of cellular internalization driven by GTPases and also their inhibitors. The following experimental part shows efficacy of apoferritin fluorescence labelling concluding that Cy2 NHS ester would be suitable for following analyses. Afterwards, expression of TfR1 and SCARA5 receptors was deter-mined and toxicity of dynamine inhibitor dynasore was tested. Internalization inhibition of Cy2 labelled apoferritin by dynasore was tested on five cell lines derived from breast tissue (HBL-100, T-47D, MCF-7, MDA-MB-231 and MDA-MB-468). The same cell lines were used for testing of internalization inhibition of Cy2 APO using dynasore, sodium azide or sucrose. The obtained results confirm internalization inhibition by dynasore and also by dynasore in combination with the other two inhibitors. At the same time, complexity of endocytic mechanisms is emphasized, highlighting need for further testing.

Keywords

apoferritin, dynasore, protinádorová terapie, nanomedicína

Keywords

apoferritin, dynasore, anticancer therapy, nanomedicine

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 25. 4. 2019

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Zbyněk Heger, Ph.D.

Mendel University in Brno

Faculty of AgriSciences

Master programme / field:
Animal Breeding / Animal Biotechnology