Kolorimetrická analýza vybraných biochemických markerů pomocí fotografické techniky

Bc. Kateřina Mackurová

Master's thesis

Colorimetric Analysis Of Biochemical Markers Using Photography

Abstract:

Za hlavní neurotransmiter v mozkových neuronech je považován acetylcholin (ACh), který je zodpovědný za přenos vzruchu. Je degradován dvěma enzymy, a to acetylcholinesterázou (AChE) (EC 3.1.1.7) a butyrylcholinesterázou (BChE) (EC 3.1.1.8) na cholin a acetát. Na inhibitory AChE je kladen velký důraz ve vědecké sféře, jelikož stále patří mezi hlavní léčiva při léčbě Alzheimerovy choroby či nemoci myastenia gravis. Cílem této práce bylo ověřit fotometrickou techniku při stanovení reakce AChE se substrátem na pH papírcích, stanovit kinetické parametry AChE a optimalizovat metodu pro stanovení inhibitoru - takrinu. Dále pak bylo cílem zjistit vliv vybraných matric na AChE pomocí fotometrické techniky. Pokus probíhal na pH papírcích MACHEREY-NAGEL a také na spektrofotometru metodou dle Ellmana. Použitá AChE byla z paúhoře elektrického. Bylo zjištěno, že fotometrická technika je reprodukovatelná a vhodná pro použití stanovení aktivity AChE a je vhodná pro měření skutečných vzorků. Vliv vybraných matric na tento enzym byl minimální.

Abstract:

Acetylcholine, which is responsible for synaptic transmission, is nowadays considered to be the main neurotransmitter in the brain. It is degraded into choline and acetate by two enzymes - acetylcholinesterase (AChE) (EC 3.1.1.7) and butyrylcholinesterase (BChE) (EC 3.1.1.8) AChE inhibitors represent an interesting subject of current scientific research since they belong to the main treatments for Alzheimer's disease or myasthenia gravis. The aim of the thesis was to verify the photometric equipment while determining the reaction of AChE with the substrate on pH papers, to determine the kinetic parameters AChE, and to optimize the method for the determination of the takrin inhibitor. Furthermore, the goal was to determine the influence of selected matrices on AChE using the photometric technique. The experiment was conducted on the pH paper from MACHEREY-NAGEL and also on the spectrophotometer using the Ellman method. The AChE, which has been used, comes from an electric eel. The photometric technique was found to be reproducible and suitable for the determination of AChE activity as well as for the measurement of real samples. The influence of selected matrices on this enzyme was minimal.

Keywords

kolorimetrie, acetylcholinesteráza, takrin, fotometrická metoda

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 7. 5. 2021

Accessible from:: 31. 12. 2999

Thesis defence

• Supervisor: prof. RNDr. Miroslav Pohanka, PhD., DSc.

University of Pardubice

Faculty of Chemical Technology

Master programme / field:
Bioanalytical Laboratory Diagnostics in Medicine / Bioanalytical Laboratory Diagnostics in Medicine