Lokalizace cytokininových receptorů Arabidopsis thaliana pomocí fluorescenčního značení

Karolina KUBIASOVÁ

Diplomová práce

Localization of cytokinin receptors in Arabidopsis thaliana using fluorescent labeling

Anotace:

Diplomová práce je zaměřena na studium lokalizace cytokininových receptorů pomocí fluorescenčního značení. V teoretické části byla provedena literární rešerše na téma cytokininy, percepce cytokininů se zaměřením na cytokininové receptory a jejich lokalizaci a na téma malé organické fluorescenční značky. V praktické části byl ověřen expresní konstrukt 35S::AHK3-GFP a byly připraveny dva další konstrukty pomocí Gateway technologie (35S::AHK4-GFP a 35S::AHK4-RFP). Buněčné suspenzní kultury Arabidopsis LER byly transformovány prostřednictvím A. tumefaciens nesoucí příslušný konstrukt. V této práci se poprvé podařilo odvodit buněčnou suspenzí kulturu Arabidopsis LER stabilně exprimující fluorescenčně značený receptor AHK3 pod kontrolou konstitutivního promotoru. Byla potvrzena lokalizace AHK3 a AHK4 receptorů v membráně endoplasmatického retikula. Jako alternativní přístup pro studium lokalizace cytokininových receptorů byla vyvinuta fluorescenční sonda iP-NBD. Kromě potvrzení lokalizace na membránách endoplasmatického retikula se v této práci podařilo ukázat, že cytokininové receptory se pravděpodobně nachází i v raných endosomech trans-Golgi sítě, kde mohou cyklovat mezi plasmatickou membránou a tímto buněčným kompartmentem.

Abstract:

The practical part deals with the verification of expression construct 35S::AHK3-GFP. The two other constructs were prepared using Gateway technology (35S::AHK4-GFP and 35S::AHK4-RFP). Arabidopsis LER cell suspension cultures were transformed with the help of A. tumefaciens carrying appropriate construct. In this thesis Arabidopsis LER cell suspension culture stably expressing fluorescently labeled AHK3 receptor under the control of constitutive promoter was established for the first time. Localization of AHK3 and AHK4 receptors in the membrane of endoplasmic reticulum was verified. As an alternative approach for the study of localization of cytokinin receptors the fluorescent probe iP-NBD was developed. Using the above approches the localization of cytokinin receptors in the membrane of endoplasmic reticulum was verified. In addition, it was also showed that cytokinin receptors are located in early endosomes of the trans-Golgi network, where they can cycle between the plasma membrane and this cell compartment.

Klíčová slova

cytokininy, AHK3, CRE1/AHK4, lokalizace receptorů, fluorescenční značení, GFP, endoplasmatické retikulum, endosomy, brefeldin A, FM4-64, 7-nitrobenzooxadiazol, konfokální mikroskopie, Gateway technologie

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 28. 4. 2014

Zveřejnit od: 28. 4. 2014

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: RNDr. Ondřej Plíhal, Ph.D.

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biochemie / Biochemie