Porovnání metod přímé a nepřímé detekce cirkulujících nádorových buněk

Sebastian REICHEL

Bakalářská práce

Comparison of methods of direct and indirect detection of circulating tumor cells

Anotace:

Kolorektální karcinom je jedno z celosvětově nejrozšířenějších maligních onemocnění postihujících každoročně více než milion osob. V současnosti jsou proto zavedena opatření ve formě narůstající prevence a pravidelných lékařských prohlídek u starších osob. Stejně tak lze pozorovat vzestup vývoje nových metod pro přímé vyšetření a včasnou diagnostiku nádorových onemocnění. Pro tyto diagnostické metody se používají biomarkery specifické konkrétně pro vyšetřovaný nádor. Pro kolorektální karcinom jsou to běžně používané markery CEA, CK-20, EGFR a EpCAM. Tyto markery jsou také využívány pro stanovení minimální reziduální choroby, jež se může objevit u pacientů, kteří už absolvovali léčbu, nebo kterým byl nádor odoperován. Minimální reziduální choroba se diagnostikuje detekcí cirkulujících nádorových buněk v krvi. Ty nesou specifický antigen, který je možné detekovat. Cílem naší práce bylo prokázat, že nepřímou metodou polymerázové řetězové reakce v reálném čase je možné minimální reziduální chorobu detekovat s citlivostí odpovídající metodám přímé detekce. Pro náš experiment jsme zvolili buněčnou linii HT-29 při různém zředění. Citlivost metody jsme testovali pro markery CEA, CK-20, EGFR a EpCAM, které jsou typické pro detekci nádorových buněk u kolorektálního karcinomu. Porovnáním výsledků PCR s daty získanými z koloniformního testu, který zastupuje přímé diagnostické metody, jsme prokázali, že real-time PCR je dostatečně citlivou metodou pro detekci minimální reziduální choroby u kolorektálního karcinomu.

Abstract:

Colorectal carcinoma is one of the most worldwide spread malignant disease affecting more than one million people every year. At present consequently, there are a lot of measures like increasing prevention and regular medical checks of elder people. Also progress in development of new methods for direct examination and early diagnosis of cancer diseases can be observed. For these diagnostic methods are used biomarkers specific for investigated tumor. For colorectal carcinoma are commonly used markers CEA, CK-20, EGFR and EpCAM. These markers are also used for determination of minimal residual disease, that may occur in patients who are already undergone radical surgery or another treatment. Minimal residual disease is diagnosed by detection of circulating tumor cells in patient's blood. These cells are carrying specific antigens that can be detected. The aim of our study was to prove that using of indirect method of real-time polymerase chain reaction for minimal residual disease detection can be used with sensitivity comparable to direct methods regularly used for detection of CTCs. For our study we chose HT-29 cell line in various dilution. We tested sensitivity for markers CEA, CK-20, EGFR and EpCAM, which are typical for tumor cells detection in colorectal carcinoma. By comparing the PCR results with the data obtained from the colony forming unit assay, which represent direct diagnostic method, we have shown that real-time PCR is a sufficiently sensitive method for the detection of minimal residual disease in colorectal cancer.

Klíčová slova

PCR, real-time PCR, RT-PCR, CFU, kolorektální karcinom, cirkulující nádorové buňky, minimální reziduální choroba, CEA, CK-20, EGFR, EpCAM

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 21. 5. 2018

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Monika Vahalíková

UNIVERZITA PALACKÉHO V OLOMOUCI

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Chemie / Bioorganická chemie a chemická biologie