Věková specifita kryptosporidií infikujících prasata.

Bc. Martina JENÍKOVÁ

Diplomová práce

Age specificity of \kur{Cryptosporidium} spp. infecting pigs.

Anotace:

Prasata jsou běžně infikována jedním druhem a jedním genotypem kryptosporidie:Cryptosporidium suis a Cryptosporidium pig genotype II.K identifikaci jednotlivých druhů a genotypů se v současné době používají molekulární metody jako polymerázová řetězová reakce (PCR) s následnou restrikční analýzou (RFLP) nebo sekvenováním. Tyto metody však nejsou zcela přesné při identifikaci smíšených infekcí. Pro vyřešení tohoto problému byly v této práci navrženy nové druhově specifické primery.Celkem bylo vyšetřeno 457 vzorků prasat pomocí mikroskopie a molekulárních metod zahrnujících PCR-RFLP, PCR s rodově nebo druhově specifickými primery a sekvenování.Přítomnost oocyst byla mikroskopicky prokázána u 12.8 % vzorků a molekulárními metodami bylo prokázáno 36.5 % pozitivních vzorků. Zatímco PCR-RFLP s rodově specifickými primery odhalila 1 smíšenou infekci Cryptosporidium suis a Cryptosporidium pig genotype II, PCR s druhově specifickými primery identifikovala 41 smíšených infekcí. Naše výsledky ukazují,že C. suis je infekční pro všechny věkové kategorie prasat a Cryptosporidium pig genotype II infikuje prasata starší 6ti týdnů. Morfometrická analýza prokázala rozdíl ve velikosti oocyst mezi Cryptosporidium suis a Cryptosporidium pig genotype II. Histologické vyšetření odhalilo, že Cryptosporidium pig genotype II infikuje epitel tenkého i tlustého střeva.

Abstract:

Two species of Cryptosporidium are routinely found in pigs: Cryptosporidium suis and Cryptosporidium pig genotype II. Identification of Cryptosporidium species and genotypes currently relies on molecular methods such as polymerase chain reaction (PCR) followed by restriction fragment lenght polymorphism (RFLP) or gene sequencing. However their applications are limited in identification of mixed infections. To overcome this problem, novel species specific primers were developed in this study. A total of 457 pig fecal samples were collected and examined using microscopy and molecular tools including PCR-RFLP, species or genus specific nested PCR and sequencing. Of these, 12.8 % were microscopicaly positive for oocysts presence and 36.5 % using molecular methods. While PCR-RFLP with genus specific primers revealed 1 case of C. suis and Cryptosporidium pig genotype II mixed infection only, nested PCR with species specific primers identified 41 cases of mixed infections. Our results showed that C. suis is infectious for all age categories of pigs and Cryptosporidium pig genotype II has been found in animals older than 6 weeks of age. Morphometric analysis proved oocyst size difference between both pig specific Cryptosporidium spp. Histological examination revealed that Cryptosporidium pig genotype II infects epithelia of both small and large intestine.

Klíčová slova

Cryptosporidium suis, Cryptosporidium pig genotype II, smíšená infekce, druhově specifické primery

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 30. 4. 2010

Zveřejnit od: 30. 4. 2010

Identifikátor: 14274

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Ing. Martin Kváč, Ph.D.

JIHOČESKÁ UNIVERZITA V ČESKÝCH BUDĚJOVICÍCH

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Biologie / Klinická biologie