Stanovení isoforem cytochromu P450 pro klinické a experimentální využití

PharmDr. Jan Juřica, Ph.D.

Doctoral thesis

Determination of cytochrome P450 isoforms for clinical and experimental exploitation

Abstract:

V metabolismu léčiv často dochází k nežádoucím interakcím v biotransformaci a vzájemnému ovlivnění plazmatických koncentrací a klinického účinku. Tyto interakce lze modelovat a včasně odhalit pomocí modelových substrátů nejvýznamnějších biotransformačních enzymů. Práce si kladla za cíl vypracovat metody pro stanovení markerů významných isoforem cytochromu P450, popřípadě více těchto metodik pro vybrané isoformy. Byly vypracovány dostatečně citlivé, reprodukovatelné a přitom jednoduché analytické metody pro stanovení markerů metabolické aktivity potkaních isoforem CYP1A2, CYP2C6/11 a CYP3A1/2. Prakticky všechny metody jsou použitelné pro in vitro experimenty s lidskými isoformami CYP1A2, CYP2C9 a CYP3A4, některé z nich i pro experimenty in vivo u člověka. Většina z prezentovaných metod byla aplikována k měření velkého množství vzorků jaterních perfuzátů i plazmy a zjišťování fenotypu vybraných isoforem cytochromu P450 u potkana a prokázala se tak v praxi jejich použitelnost pro farmakokinetické studie interakcí léčiv v preklinickém experimentu.

Abstract:

In multiple drug therapy, there often appears pharmacokinetic interaction in drug biotransformation and influencing of drug plasma levels and thus the clinical effect influencing by one another. These interactions are predictable and can be easily recognized by modelling such interaction with selective marker of the metabolism.The aim of this dissertation was to develop and validate methods for the determination of the most important markers and their metabolites in biological samples.There were developed sensitive, reproducible and simple analytical methods for the determination of markers of metabolic activity of rat isoforms CYP1A2, CYP2C6/11 and CYP3A1/2. All of these methods are applicable for in vitro experiments with human isoforms CYP1A2, CYP2C9 and CYP3A4, some of them either for the human in vivo experiments. Most of the presented methods were successfully applied in measurement of the huge number of samples of liver perfusates and plasma and for phenotype determination in rats and have sufficiently proved its applicability in preclinical pharmacokinetic experiments.

Keywords

cytochrome P450, activity, isoform, determination, marker, HPLC

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 4. 7. 2008

Thesis defence

• Date of defence: 4. 7. 2008
• Supervisor: doc. RNDr. Josef Tomandl, Ph.D.

Masaryk University

Faculty of Medicine

Doctoral programme / field:
General Medicine / Medical Chemistry and Biochemistry