Analýza mutací u monoklonálních gamapatií pomocí sekvenačních technik

Bc. Markéta Wayhelová

Master's thesis

Analyses of mutations in monoclonal gammopathy using sequencing techniques

Abstract:

Mnohočetný myelom představuje druhé nejčastější hematoonkologické onemocnění. Vyznačuje se výraznou klinickou a molekulárně genetickou heterogenitou, což komplikuje rozhodování při volbě optimálního terapeutického postupu u konkrétního pacienta. Studium genových mutací a jejich patologie přináší do objasnění patogeneze MM nový pohled z hlediska iniciace a progrese onemocnění z premaligních stavů do plně symptomatického stavu. Cílem této diplomové práce bylo zavést a optimalizovat metodu „high resolution melting“ (HRM), jež slouží jako screeningová i cílená metoda pro detekci změn v sekvenci DNA, následovanou Sangerovým sekvenováním pro identifikaci dané sekvenční změny. Zavedená metodika byla aplikována na souboru 40 pacientů s nově diagnostikovaným MM. Bylo nalezeno celkem 15 sekvenčních změn u 13 pacientů. Výsledky mutačních analýz byly statisticky zhodnoceny v kontextu s výsledky molekulárně cytogenetických vyšetření a byly nalezeny statisticky významné souvislosti mezi výskytem genových mutací a některými chromozomovými aberacemi. Zjištěné poznatky podtrhují význam studia patogeneze MM na úrovni sekvence z hlediska individualizace terapeutického postupu.

Abstract:

Multiple myeloma represents the second most frequent hematooncologic disease. It is characterized by a significant clinical and molecular genetic heterogeneity, which causes problems when an optimal therapeutic procedure for an individual patient is chosen. The study of gene mutations and their pathology carries a new view to MM pathogenesis when its initiation and progression from premalignant precursor to fully symptomatic condition is discussed. The main aim of this diploma thesis was to introduce and optimize a method „high resolution melting“ (HRM), which serves as both the screening and targeted method for DNA sequence changes detection. HRM must be followed by Sanger sequencing for the confirmation and identification of given DNA sequence changes. This methodics was applied to a cohort containing 40 patients with newly diagnosed MM. Totally, we found 15 DNA sequence changes in 13 patients. Our results were statistically evaluated in the context to results of molecular cytogenetic analyses and we found statistically significant relationships between the presence of gene mutations and some chromosomal aberrations. Our findings underlie how important is to study MM pathogenesis on DNA sequence level in the context to individualization of therapeutic prodecure.

Keywords

mnohočetný myelom, mutace, HRM, sekvenování, protoonkogen, tumorový supresor, multiple myeloma, mutation, sequencing, proto-oncogene, tumor suppressor

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 13. 5. 2014

Thesis defence

• Date of defence: 12. 6. 2014
• Supervisor: doc. RNDr. Petr Kuglík, CSc.

Masaryk University

Faculty of Science

Master programme / field:
Experimental Biology / Molecular Biology and Genetics