Analýza posttranslačních modifikací ovalbuminu

Bc. Eva Coufalová

Diplomová práce

Analysis of ovalbumin posttranslational modifications

Anotace:

Tato diplomová práce se zabývá studiem fosforylace ovalbuminu pomocí kapilární zónové elektroforézy a hmotnostní spektrometrie. V teoretické části jsou popsány základní principy elektromigračních technik a hmotnostní spektrometrie a také struktura ovalbuminu, jeho posttranslační modifikace a význam při potravinových alergiích. Experimentální část práce se zabývá přípravou magnetických nosičů s imobilizovanými enzymy pro proteolytické štěpení a defosforylaci ovalbuminu a také přípravou vzorku ovalbuminu pro CZE separaci. Jednotlivé kroky přípravy vzorku jsou ověřovány pomocí MALDI-MS analýzy. Poslední část se věnuje optimalizaci elektroforetické separace fosfopeptidů tohoto proteinu před a po enzymové defosforylaci.

Abstract:

This thesis deals with the study of phosphorylation of ovalbumin by capillary zone electrophoresis and mass spectrometry. The theoretical part describes the basic principles of electromigration techniques and mass spectrometry as well as the structure of ovalbumin, its posttranslational modifications and importance in food allergies. The experimental part of this work is focused on ovalbumin sample preparation for CZE separation, including proteolytic cleavage and dephosphorylation of ovalbumin by enzymes immobilized on magnetic carriers. All sample preparation steps are verified by MALDI-MS analysis. Finally, the optimized separation conditions are used for CZE analysis of ovalbumin phosphopeptides before and after enzymatic dephosphorylation.

Klíčová slova

Ovalbumin, kapilární zónová elektroforéza, MALDI-MS, imobilizace enzymů

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 7. 5. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 2. 6. 2015
• Vedoucí: Ing. Václav Staněk, Ph.D.

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Speciální chemicko-biologické obory / Bioanalytik