Změny metabolismu buněk po působení modelových toxických látek

Bc. Barbora Tošovská

Diplomová práce

Changes In Cellular Metabolism After Treatment With Toxic Substances

Anotace:

Diplomová práce se zabývá změnami energetického metabolismu buňky po působení modelových toxických látek. Teoretická část se věnuje popisu mitochondrií, podrobnému popisu dýchacího řetězce, zejména syntéze ATP, a metodám detekce koncentrace ATP. Dále je zde popsán možný vztah proteinů teplotního šoku (= HSP) a apoptózy. V závěru jsou uvedeny metody pro detekci HSP proteinů. Experimentální část se věnuje optimalizaci přípravy buněčného materiálu a luminiscenční metody pro detekci intracelulární koncentrace ATP po působení modelových toxických sloučenin na buněčných liniích SH SY5Y a A549. Jako modelové jsme zvolili cisplatinu, CdCl2, acetaminofen a straurosporin. Pro popis změn energetického metabolismu u testovaných buněk jsme použili WST 1 test, fluorescenční sondu monochlorobiman, stanovení koncentrace ATP a metodu Simple Western. Morfologii buněk inkubovaných s toxickými látkami jsme pozorovali pod mikroskopem ve fázovém kontrastu, pro vizualizaci cytoskeletu jsme zvolili fluorescenčně značený faloidin a pro pozorování jader sondu Hoechst 33258. V závěru práce jsou výsledky diskutovány.

Abstract:

The diploma thesis deals with changes in the energy metabolism of the cell after treatment with toxic substances. First, the theoretical part of the thesis describes the mitochodria, a detailed description of the respiratory chain, especially the synthesis of ATP, and methods detecting ATP concentration. Then, a possible relationship between Heat Shock Proteins (HSP) and apoptosis is described. Finally, the methods used for detection of HSP proteins are described. The experimental part is devoted to the optimization of cell material preparation and luminescence method for the detection of intracellular ATP concentration after treatment with model toxic compounds in SH SY5Y and A549 cell lines. We chose cisplatin, CdCl2, acetaminophen and staurosporine as model compounds. To complete the description of changes of energy metabolism in tested cells, we used the WST 1 test, fluorescence probe monochlorobimane and the Simple Western method. We observed the morphology of cells incubated with toxic substances using phase contrast and fluorescence microscopy for cytoskeletal visualization and nuclear observation. At the end of the thesis, the results are discussed.

Klíčová slova

Adenosintrifosfát, cytotoxicita, buněčná linie SH-SY5Y, buněčná linie A549, proteiny teplotního šoku, \kur{Simple Western}.

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 6. 5. 2022

Zveřejnit od: 31. 12. 2999

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: doc. RNDr. Tomáš Roušar, Ph.D.

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Bioanalytická laboratorní diagnostika ve zdravotnictví / Bioanalytická laboratorní diagnostika ve zdravotnictví