Vývoj a validace HPLC-MS metody pro stanovení vybraných antibiotik a její aplikace na reálných vzorcích

Veronika ŠVIDRNOCHOVÁ

Bachelor's thesis

Development and validation of HPLC-MS method for determination of selected antibiotics and its aplication on real samples

Abstract:

Antibiotika patří v současnosti mezi nejpoužívanější léčiva. Tato práce se zabývá vývojem a validací HPLC-MS metody ke stanovení čtyř vybraných antibiotik (amoxicilinu, klarithromycinu, trimethoprimu a sulfamethoxazolu) a aplikací této metody na vzorky říční a odpadní vody. Byly nalezeny optimální parametry metody (složení mobilní fáze, průtok mobilní fáze, nástřik vzorku, teplota kolony, tlak nebulizního plynu, průtok a teplota sušicího plynu). Poté byla provedena validace optimalizované metody. Byly stanoveny limity detekce (5 ?g/L pro amoxicilin, 2 ?g/L pro sulfamethoxazol, 0,5 ?g/L pro trimethoprim a klarithromycin) a limity kvantifikace (25 ?g/L pro amoxicilin, 5 ?g/L pro sulfamethoxazol a 1 ?g/L pro trimethoprim a klarithromycin). Na základě ostatních parametrů validace (determinační koeficienty vyšší než 0,990, odchylka opakovatelnosti a mezidenní přesnosti nižší než 20 %, odchylka přesnosti a správnosti nižší než 10 %) lze říci, že HPLC-MS metoda je vhodná ke stanovení antibiotik. Na závěr byla metoda aplikovaná na vzorky říční a odpadní vody. Ve vzorku odpadní vody z čistírny odpadních vod byl nalezen klarithromycin a to v koncentraci 523 ng/L.

Abstract:

Antibiotics are the most common pharmaceuticals nowadays. This thesis deals with development and validation of HPLC-MS method for determination of four selected antibiotics (amoxicillin, clarithromycin, trimethoprim and sulfamethoxazole) and application of the method on samples of river water and wastewater. Optimum parameters of method were found (such as composition of the mobile phase, flow of the mobile phase, sample injection, column temperature, nebulite gas pressure, flow and temperature of the drying gas). Validation of optimized method was performed after that. Limits of detection (5 ?g/L for amoxicillin, 2 ?g/L for sulfamethoxazole, 0,5 ?g/Lfor trimethoprim and clarithromycin) and limits of quantification (25 ?g/L for amoxicillin, 5 ?g/L for sulfamethoxazole, 1 ?g/L for trimethoprim and clarithromycin) were determined. Based on the other validation parameters (coefficient of determination higher than 0,990, deviation of repeatability and inter-day precisions lower than ?20 %, deviation of precision and accuracy lower than ? 10 %), the development method could be considered to be suitable for determination of antibiotics. In conclusion, the method was applied on samples of river water and wastewater. In the sample of wastewater from a wastewater treatment plant, clarithromycin was found at the concentrations of 523 ng/L.

Keywords

antibiotika, amoxicilin, klarithromycin, sulfamethoxazol, trimethoprim, HPLC, MS, validace

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 22. 4. 2016

Accessible from:: 22. 4. 2016

Thesis defence

• Supervisor: doc. RNDr. Jiří Kalina, Ph.D.

University of Ostrava

Faculty of Science

Bachelor programme / field:
Chemistry / Chemistry