Protinádorový účinek derivátů vitamínu E enkapsulovaných v liposomech

Bc. Eva Vrublová

Diplomová práce

Anotace:

a-Tokoferyl sukcinát (a-TOS) a a-tokoferyl malát amid (a-TAM) jsou velmi zajímavé analogy vitamínu E, které indukují apoptózu mnoha buněčných linií ovlivněním mnoha cest. Tatto analoga jsou specifická pouze na nádorové buňky. Jako nosič pro tyto deriváty se zdají být vhodné liposomy. Tyto liposomy byly připraveny, charakterizovány a testovány in vitro na nádorových liniích a in vivo na dutých vláknech implantovaných myším. pro přípravu liposomů byla využita metoda hydratace fosfolipidového filmu, byla použita extruze přes membrány o určité velikosti pórů nebo homogenizace přes úzkou štěrbinu.Byly připraveny liposomy s různou koncentrací derivátů. Také byl úpoužit diferenciální skenovací kalorimetr na měření fázových přechodů liposomů. Sacharosa se používá při lyofilizaci. Byly zkoušeny různé molární poměry sacharosa : lipid a bylo zjištěno, že dostačující molární poměr je 5:1. Připravené liposomy byly testovány in vitro na myším melanomu B16F10 a lidké nádorové linii prsu MCF-7. V tomot případě byla prokázána p roapoptotická aktivita jak volných derivátů, tak derivátů začleněných v liposomu. Toxicita liposomálního preparátu a-TAM značně zvyšuje toxicitu samotného a-TAM. Protirakovinný efekt byl studován na dutých vláknech obsahujících buněčnou linii MCF-7 a B16F10 imlantovaných myším. Čtyři dávky byly aplikovány během pěti dní (i.v., 500 g a-TAM na dávku). Cytostatický efekt byl demonstrován na obou liniích.

Abstract:

a-Tocopheryl succinate (a-TOS) and a-tocopheryl maleylamide (a-TAM) are very interesting analogues of vitamin E, which induce apoptosis in multiple cancer cell lines in a selective manner, by activating the intrinsic apoptic pathways. These analogues are specific only for tumor cells. Liposomes appear to be the effect carrier system for these analogues. Liposomal preparations were characterized by physical-chemical methods and tested in vitro on tumor cell lines and in vivo on hollow fibres implanted into mice. The method of lipid film hydration was used for preparation of liposomes. Extrusion through membranes with different pore sizes or high pressure homogenization were applied as secondary processing methods. Liposomes with various concentrations of a-TOS were prepared and their morphology was observed by transmission electron microscopy. New non-vesicular phase appeared at 20% of a-TOS in lipid composition, hence the lipid composition with 10% of a-TOS was used for further studies. Sucrose was used for lyophilisation to preserve the liposomal preparations. Different molar ratio of sucrose and total liposomal lipids was tested and molar rate 5 : 1 was found to be optimum for preparation of lyofilized liposomal preparations. The toxicity of liposomal preparation of a-TAM and a-TOS was tested in vivo in mice and these experiments verified, that liposomisation of a-TAM decreased significantly its toxicity. Anticancer effect of liposomal formulation was tested in vivo on hollow fibres implants containing MCF-7 or B16F10 cancer cell lines. Four doses were applied within 5 days intravenously to mice c 500 g per dose, 2 mg of cumulative dose). Cytostatic effect was demonstrated on both cell lines tested. Low toxicity and anticancer effect of liposomal a-TAM, which is one of the most potent anticancer analogues of vitamin E, is promising for further development in this field.

Klíčová slova

a-TOS, a-TAM, liposom, extruze, MCF-7 buněčná linie a-TOS, liposome, extrusion, MCF-7 cell line

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 27. 4. 2006

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 23. 5. 2006
• Vedoucí: RNDr. Jaroslav Turánek, CSc.

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Chemie / Biochemie