Vývoj LC-MS/MS metody pro stanovení biomarkerů atypické myopatie koní ze suché krevní skvrny

Bc. Martina KADLÁČKOVÁ

Master's thesis

Development of LC-MS/MS method for the determination of biomarkers of equine atypical myopathy from dry blood spot

Abstract:

Atypická myopatie (AM) je onemocnění provázené akutní rhabdomyolýzou postihující zejména koně. Pro pacienty je fatální a většina z nich umírá do pár dnů od prvních příznaků. S tím souvisí problematika rychlosti a dostupnosti diagnostiky, která je v progresi tohoto onemocnění stěžejní. Jednou z analytických technik, která odpovídá tomuto požadavku, je kapalinová chromatografie s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS). Pro stanovení AM ve vzorcích suchých krevních skvrn (DBS) byla vyvinuta a částečně validována LC-MS/MS metoda bez derivatizace, která se vyznačuje snadnou a rychlou přípravou vzorku, krátkou dobou analýzy a nízkou finanční nákladovostí. Aplikací této metody na DBS vzorky pacientů a vzorky suspektních případů koní byla potvrzena přítomnost diagnosticky významných markerů AM, hypoglycinu A a MCPA-karnitinu. Dále byly ve vzorcích pacientů významně zvýšeny koncentrace specifických acylkarnitinů a acylglycinů se středně dlouhým řetězcem. Rovněž byly studovány a interpretovány vzorky koní se zátěžovou myopatií. Mimo jiné byla také sledována dynamika změn koncentrací u opakovaných odběrů DBS vzorků pacienta s AM, u kterého byly zaznamenány trendy u zmíněných markerů. Nově vyvinutá LC-MS/MS metoda bude po úplné validaci zavedena pro diagnostiku AM koní v České republice.

Abstract:

Atypical myopathy (AM) is a disease accompanied by acute rhabdomyolysis affecting mainly horses. It is fatal for patients and most die within a few days of first symptoms. This raises the issue of speed and availability of diagnosis, which is crucial in the progression of this disease. One of the analytical techniques that is suitable is liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). An LC-MS/MS method without derivatization has been developed and partially validated for the determination of AM in dry blood spot (DBS) samples, which is characterized by easy and rapid sample preparation, short analysis time and low financial cost. By applying this method to DBS samples from patients and samples from suspected equine cases, the presence of diagnostically significant markers of AM, hypoglycin A and MCPA-carnitine was confirmed. Furthermore, concentrations of specific medium-chain acylcarnitines and acylglycines were significantly increased in patient samples. Samples from horses with exertional myopathy were also studied and interpreted. Among other things, the dynamics of changes in concentrations in repeated DBS samples from a patient with AM, in which trends in the mentioned markers were observed, were also studied. The newly developed LC-MS/MS method will be introduced for the diagnosis of equine AM in the Czech Republic after full validation.

Keywords

atypická myopatie koní, hypoglycin A, methylencyklopropylglycin, Acer pseudoplatanus, Acer negundo, beta-oxidace mastných kyselin, kapalinová chromatografie, hmotnostní spektrometrie, validace

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 22. 4. 2024

Thesis defence

• Supervisor: Mgr. Dana Dobešová

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Master programme / field:
Biochemistry / Biochemistry