Optimalizace přípravy akrylamidového gelu pro elektroforézu proteinů.

Veronika MÁLKOVÁ

Bakalářská práce

Optimization of acrylamide gel preparation procedure for protein electrophoresis.

Anotace:

Tato práce se zabývá optimalizací přípravy akrylamidového gelu pro elektroforézu proteinů za denaturujícíh podmínek pomocí detergentu SDS. Samotná příprava akrylamidového je principiálně jednoduchá, avšak zajistit definované vlastnosti gelů v dlouhodobém časovém horizontu v konkrétních podmínkách je daleko obtížnější. Důležitou roli při této přípravě hrají hlavně koncentrace jednotlivých složek reakční směsi a stáří použitých chemikálií. Cílem této práce bylo optimalizovat přípravu akrylamidového gelu pro elektroforézu proteinů se zaměřením na koncentraci a stáří použitých chemikálií. Pro 10 % polyakrylamidový gel bylo stanoveno následující optimální složení polymerační směsi (vztaženo k celkovému objemu 10 ml): 150 ?l 10 % persíranu amonného (APS) a 20 ?l N, N, N', N'-tetramethylendiaminu (TEMED), 4 ml deionizované vody, 3,3 ml 30 % akrylamidové směsi, 2,5 ml 1,5 M Trisu (pH 8,8) a 100 ?l 10 % SDS. Ukázalo se, že rozhodující složkou při přípravě polyakrylamidového gelu je persíran amonný (APS). Pro úspěšné provedení elektroforézy proteinů je nutné, aby tento iniciátor (APS) byl po 3 měsících čerstvě namíchán.

Abstract:

This work deals with optimization of preparation of acrylamide gel for electrophoresis of proteins under the denaturing conditions by means of detergent SDS. Own preparation of acrylamide is principally simple, but to ensure defined properties of gels in the long term in the actual conditions is more difficult. Concentrations of reaction components and age of chemicals play an important role in preparation. The aim of this work was to optimize preparation of acrylamide gel for electrophoresis of proteins with focus on concentration and age of the used chemicals. Following optimal composition of polymerization mixture was determined in the case of 10 % polyacrylamide gel (relatited to total volume 10 ml): 150 ? l 10% ammonium persulphate (APS) and 20 ? l of N, N, N ', N'-tetramethylenediamine (TEMED), 4 ml of deionized water, 3.3 ml of 30% acrylamide mixture, 2.5 ml of 1.5 M Tris (pH 8.8) and 100 ?l 10% SDS. It was found that crucial component in the preparation of polyacrylamide gel is ammonium persulphate (APS). It is essential for successful realization implementation of electrophoresis of proteins to mix initiator (APS) freshly after 3 months.

Klíčová slova

Polyakrylamidový gel, elektroforéza proteinů, persíran amonný

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 22. 4. 2013

Zveřejnit od: 22. 4. 2013

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: Mgr. Michal Haluzík, Ph.D.

OSTRAVSKÁ UNIVERZITA V OSTRAVĚ

Přírodovědecká fakulta

Bakalářský studijní program / obor:
Chemie / Chemie