Zvýšení kryoprotektivního účinku bezžloutkových ředidel semene přídavkem nízkodenzitního lipoproteinu

Petra Skalová

Master's thesis

Increase of non-yolk semen diluter cryoprotective effects by low-density lipoprotein addition

Abstract:

Nízkodenzitní lipoproteiny (LDL) jsou funkční složkou vaječného žloutku, která zajišťuje rezistenci vůči chladovému šoku při mrazení a rozmrazování a zlepšuje motilitu po rozmrazení. V dnešní době je intenzivně zkoumáno použití extrahovaného LDL. Došlo by ke zkvalitnění inseminačních dávek a zamezení rizika kontaminace při používání vaječného žloutku. Cílem práce bylo ověřit hypotézu, zda přídavek LDL zlepší kryoprotektivní vlastnosti vybraných bezžloutkových ředidel býčího ejakulátu. Experimentální inseminační dávky byly získány od osmi býků plemene Holštýnský skot a Český strakatý skot na inseminační stanici Natural s.r.o. v Hradištku pod Medníkem ve čtyřech odběrových dnech. Byla použita bezžloutková ředidla AndroMed a Bioxcell se čtyřmi typy ředění - kontrolní vzorek bez přídavku LDL, 4%, 6% a 8% přídavkem LDL. Dávky byly konzervovány standardním způsobem a uchovány v tekutém dusíku. Po rozmražení byly pomocí CASA modulu hodnoceny tři parametry rychlosti motility - VAP, VSL, VCL a tři parametry dráhy - LIN, STR a WOB. Dále byly stanoveny parametry přežitelnosti spermií pomocí fluorescenčního barvení. U ředidla AndroMed dosahovaly nejlepších výsledků kontrolní vzorek a vzorek s 4% přídavkem LDL, po dvou inkubace dosahovaly nejlepších výsledků vzorky s 6% a 8% přídavkem LDL. Ihned po rozmražení bylo ve všech vzorcích s přidaným LDL více živých spermií než v kontrolním vzorku. Po dvou hodinách inkubace nebyly rozdíly v podílech průkazné. U ředidla Bioxcell dosahovaly ihned po rozmražení nejlepších výsledků vzorky s 6% a 8% přídavkem LDL, po dvou hodinách inkubace dosahovaly nejlepších výsledků vzorky s 4% a 8% přídavkem LDL. Ihned po rozmražení i po dvou hodinách inkubace obsahovaly všechny vzorky s přidaným LDL více živých spermií než kontrolní vzorek. Lepší efekt přídavku LDL byl pozorován u ředidla Bioxcell v obou časech inkubace. Parametry přežitelnosti spermií byly přídavkem LDL zlepšeny u obou použitých ředidel.

Abstract:

Low density lipoprotein (LDL) is a functional component of the egg yolk, which confers resistance against cold shock during freezing and thawing and enhances motility after thawing. Nowadays, it is intensively studied using of the extracted LDL. This would lead to the improvement of insemination doses and reduce the risk of contamination when using egg yolk. The object was to test the hypothesis, whether the addition of LDL would improve the cryoprotective attributes of selected non-yolk thinners for bull semen. Experimental insemination doses were obtained from eight bulls of Holstein breed and Czech fleckvieh breed at semen collection center Natural s.r.o. in Hradištko pod Medníkem in four sampling days. Non-yolk extenders AndroMed and Bioxcell were used on four types of dilution - a control sample without the addition of LDL, 4%, 6% and 8% addition of LDL. Doses were conserved in a standard manner and stored in liquid nitrogen. Then, after thawing, were evaluated three parameters of speed motility using CASA module - VAP, VSL, VCL and three parameters of velocity - LIN, STR and WOB. Further, the parameters of the sperm viability were determined using fluorescent staining. Using extender AndroMed the best results were achieved by the control sample and sample with 4% addition of LDL. After two hours incubations, samples with 6% and 8% addition of LDL reached the best results. Immediately after thawing all samples with added LDL had more live sperm count than in the control sample. No significant differences in the evidence was observed after two hours of incubation. For BioxcelL extender, the best results were reached immediately after thawing in samples with 4% and 8% addition of LDL. All samples with added LDL contained more live sperm count than the control sample after two hours of incubation. Improved effect of the addition of LDL was observed in Bioxcell extender on both times of incubation. The parameters of sperm viability were improved with both extenders by the addition of LDL.

Keywords

spermie, LDL, motilita, přežitelnost, býk

Keywords

bull, sperm, LDL, motility, viability

Language used: Czech

Date on which the thesis was submitted / produced: 11. 4. 2015

Thesis defence

• Supervisor: doc. MVDr. Radko Rajmon, Ph.D.

Czech University of Life Sciences Prague

Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources

Master programme / field:
Genetic Technologies and Breeding / Biotechnology of Reproduction