Charakterizace myší stabilně transfekované reportérové linie odvozené od Hepa-1c1c7 buněk pro sledování transkripční aktivity aryl uhlovodíkového receptoru

Richard VÁCLAVEK

Bachelor's thesis

Characterization of mouse stable transfected reporter cell line derived from Hepa-1c1c7 cells for assessment of transcriptional activity of aryl hydrocarbon receptor

Anotácia:

Tato bakalářská práce se zabývá sledováním transkripční aktivity AhR v myší stabilně transfekované reportérové linii AhRepa odvozené od Hepa-1c1c7 buněk. V teoretické části se zabývá reportérovými geny, popisuje stavbu, funkci a expresi AhR v různých orgánech, poukazuje na rozdíly mezi lidským a myším AhR a v neposlední řadě popisuje typy reportérových systémů a jejich využití. V praktické části byla reportérová linie AhRepa charakterizována pomocí modelových ligandů TCDD (2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin), FICZ (6-formylindolo[3,2b]karbazol) a omeprazolu. Nejprve byly stanoveny koncentrace ligandů tak, aby nebyly cytotoxické pro zvolenou buněčnou linii formou testu proliferace buněk krystalovou violetí a poté byly tyto koncentrace použity pro stanovení transkripční aktivity AhR. Následně byla stanovena transkripční aktivita AhR v závislosti na čase a také byla sledována její inhibice působením antagonistů. Na závěr byl sledován vliv dlouhodobé kultivace buněk na transkripční aktivitu AhR

Abstract:

This bachelor thesis deals with monitoring the transcriptional activity of AhR in a mouse stable transfected reporter cell line AhRepa derived from Hepa-1c1c7 cells. The theoretical part focuses on reporter genes, describing their structure, function, and AhR expression in various organs, highlighting the differences between human and mouse AhR, and finally describing types of reporter systems and their utilization. In the practical part, the AhRepa reporter cell line was characterized employing the model ligands, TCDD (2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin), FICZ(6-formylindolo[3,2b]karbazol and omeprazole. Firstly, ligand concentrations were determined to be non-cytotoxic for the chosen cell line using a crystal violet cell proliferation assay, and then these concentrations were used to determine the transcriptional activity of AhR. Subsequently, the transcriptional activity of AhR was determined over time and its inhibition by antagonists was also monitored. Finally, the impact of long-term cell culture on the transcriptional activity of AhR was assessed

Kľúčové slová

AhR, AhRepa, reportérové systémy, TCDD, FICZ, omeprazol

Jazyk práce: Czech

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 3. 5. 2024

Obhajoba závěrečné práce

• Vedúci: Mgr. Aneta Grycová, Ph.D.

Palacký University Olomouc

Faculty of Science

Bachelor programme / odbor:
Molecular and Cell Biology / Molecular and Cell Biology