Působení potenciálních léčiv na expresi genů v jaterních myofibroblastech

Bc. Jan Šafka

Diplomová práce

Agents with potential therapeutic effect on gene expression in rat liver myofibroblasts

Anotace:

Fibrotizační proces v játrech je složitý proces, při kterém je klíčová aktivace jaterních hvězdicových buněk a jaterních myofibroblastů. V této práci jsme se zabývali vlivem kultivačního prostředí na expresi genů v jaterních myofibroblastech potkanů. Srovnávali jsme běžný způsob kultivace buněk na plastových Petriho miskách s kultivací v trojrozměrném prostředí kolagenního gelu a sledovali vliv ligandu receptoru aktivovaného proliferátory peroxisomů ? (PPAR-?), látky WY-14643. Myofibroblasty byly vyizolovány opakovaným pasážováním frakce neparenchymových jaterních buněk potkanů, získaných po enzymatické perfuzi jater. Izolované buňky byly vysazeny na plastové Petriho misky a do kolagenního gelu. Do kultivačních médií byla přidána sledovaná látka WY-14643 v různých koncentracích. Po 12 hodinové kultivaci byla z buněk vyizolována celková RNA a syntetizována cDNA. Exprese genů byla stanovena pomocí kvantitativní polymerázové reakce (rtRT-PCR) a data statisticky zpracována. Pozorovali jsme, že látka WY-14643 ovlivňuje rozdílně expresi mRNA myofibroblastů kultivovaných na plastové Petriho misce a myofibroblastů kultivovaných v prostředí kolagenního gelu, a její působení je závislé na koncentraci. Mezi ovlivněné geny patří protein extracelulární matrix - osteopontin, matrixové metaloproteinasy 2 a 9 (MMP-2, MMP-9), hlavní profibrogenní cytokin ? transformující růstový faktor ? (TGF-?) a receptor PPAR-?.

Abstract:

Liver fibrogenesis is the result of activation of certain cell types - hepatic stellate cells and liver myofibroblasts. In this thesis we have studied the influence of cultivation environment on gene expression in rat liver myofibroblasts. We have compared the common way of cell cultivation on plastic Petri dishes with cell cultivation in collagen gel three-dimensional environment. The myofibroblasts were treated with the compound WY-14643, ligand of peroxisome proliferator activated receptors ? (PPAR-?). The myofibroblasts were isolated after ensymatic perfusion of rat liver by repeated passaging from a fraction of non-parenchymal cells. Isolated cells were planted on plastic Petri dishes and in collagen gels. The studied substance WY-14643 were added into the cultivation mediums in certain concentrations. After 12 hours total mRNA was isolated from the cells and cDNA was synthetized. Gene expression was determined by real-time reverse transcription polymerase chain reaction (rtRT-PCR) and data were statistically analysed. We have observed that WY-14643 affects differently mRNA expression of myofibroblasts cultivated on plastic Petri dishes and myofibroblasts cultivated in collagen gel environment. The effect of WY-14643 depends on the concentration. Among the affected genes there were extracellular matrix protein osteopontin, matrix metalloproteinases 2 and 9 (MMP-2, MMP-9), the main pro-fibrotic cytokine transforming growth factor ? (TGF-?) and PPAR-?.

Klíčová slova

jaterní myofibroblasty, exprese genů, jaterní fibróza, WY-14643

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 4. 5. 2011

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 1. 6. 2011
• Vedoucí: prof. RNDr. Zuzana Bílková, Ph.D.

Univerzita Pardubice

Fakulta chemicko-technologická

Magisterský studijní program / obor:
Speciální chemicko-biologické obory / Analýza biologických materiálů