Faktory ovlivňující mrazitelnot ejakulátu býků

Bc. Tereza Dvorská

Diplomová práce

Factors influencing the bull sperm freezability

Anotace:

Vaječný žloutek je běžnou složkou ředidel používaných ke kryokonzervaci spermií. Na základě jeho substituce nízkodenzitním lipoproteinem (LDL, z angl. low density lipoprotein) bylo zjištěno, že právě tato složka udává jeho kryoprotektivní vlastnosti. Chrání tak spermie proti chladovému šoku a dalším změnám čímž je udržována jejich fertilizační schopnost i po rozmrazení. Kvalita spermií v inseminační dávce je však ovlivněna mnoha dalšími vnitřními i vnějšími faktory. Cílem této práce bylo zhodnotit, zdali je efekt přídavku nízkodenzitního lipoproteinu (LDL) v ředidle ejakulátu významně ovlivňován vybranými faktory - typem použitého ředidla, plemennou příslušností býka, individualitou býka a termínem odběrového dne. Na inseminační stanici Natural s.r.o. v Hradišťku pod Medníkem byl ve čtyřech opakováních odebírán ejakulát od vybrané skupiny šesti býků (tří zástupců holštýnského plemene a tří zástupců českého strakatého skotu). K výrobě inseminačních dávek byly použity dva typy bezžloutkových ředidel na bázi sojového lecitinu (AndroMed a BioXCell). Ke každému z nich byly přidány vybrané koncentrace LDL 4, 6 a 8 % a ředidlo bez LDL sloužilo jako kontrola. Inseminační dávky byly zmrazeny standardním způsobem a poté uchovány v tekutém dusíku. Pro určení kvalitativních vlastností spermií byla zvolena metoda hodnocení jejich motility pomocí počítačové analýzy (CASA, z angl. Computer Assisted Sperm Analysis). Ihned po rozmrazení a následně po dvouhodinové inkubaci (37 °C) byly vyhodnoceny kinematické parametry spermií společně s celkovým procentem motilních spermií a procentem progresivně pohybujících se spermií. Údaje byly následně statisticky zpracovány a na základě výstupů byly vybrány jako reprezentativní kinematické parametry VAP, VCL, ALH a procento progresivně motilních spermií (PMOT). Vyšších hodnot daných parametrů dosahovaly téměř ve všech hodnoceních vzorky ředěné ředidlem BioXCell oproti AndroMed. I přes námi prokázanou existenci variability výsledků v závislosti na době inkubace, plemenné příslušnosti, individualitě jedince a termínu odběrového dne, lze určit pravděpodobnou optimální koncentraci přídavku LDL, a to pro ředidlo BioXCell 6% a pro AndroMed 8% koncentraci. Bylo by vhodné v dalších studiích vyhodnotit vliv přídavku LDL k bezžloutkovým ředidlům na kvalitu spermií po rozmrazení na základě většího množství jejich kvalitativních parametrů a měly by být brány na zřetel faktory, které mohou ovlivňovat variabilitu výsledků, jež byly prokázány v této práci.

Abstract:

An egg yolk is a common component of diluents used as protectants of sperm cells during the process of cryopreservation. Its substitution by low density lipoproteins (LDL) has shown that it is the LDL that provides the egg yolk with its cryoprotective characteristics: it protects sperms against cold shock and other changes, thus helping to preserve their fertilization ability even after the freezing-thawing process. However, the sperm quality is affected by many other internal and external factors. Therefore, the aim of this study was to evaluate if the effect of the addition of LDL to the diluent of the ejaculate is significantly influenced by the following selected factors - the type of used diluent, the bull´s breed and its individuality and the date of the sampling. Experimental insemination doses were repetitively (four times) obtained from a group of six bulls (three Holstein bulls and three Czech Fleckvieh bulls) at the Natural Hradišťko insemination service s.r.o. The samples of semen were diluted with two types of non-egg diluents containing soybean lecithin extracts (AndoMed and BioXCell). To each of these diluents, LDL at 4, 6, and 8% concentration was added; a non-LDL diluent served as a check. All the insemination doses were frozen by a standard procedure and then stored in liquid nitrogen. The CASA system (Computer Assisted Sperm Analysis) was selected for the evaluation of the sperm motility. Immediately after thawing and then after two hours of incubation in water bath (37 °C), the values of kinematic parameters were obtained from the samples - the total percentage of motile sperm and the percentage of progressively motile sperm. These data were then statistically processed; based on the outputs, VAP, VCL, ALH and the percentage of progressively motile sperm (PMOT) were chosen as representative kinematic parameters. The values of the parameters were higher in almost all evaluated samples diluted with BioXCell, compared to those diluted with AndroMed. Even though we demonstrated the existence of a high variability of results depending on the time of incubation, bull breed, the individuality of the bull and the date of the sampling, it could be said that the best concentration of added LDL is 6 % for BioXCell and 8 % for AndroMed. It would be useful to perform more experiments evaluating the effect of adding LDL to non-egg diluents on the quality of the thawed sperm. In these experiments, more sperm quality parameters should be examined and factors influencing the variability of results demonstrated in this work should be taken into consideration.

Klíčová slova

LDL, individualita, býk, sperma, mrazitelnost

Keywords

LDL, individuality, bull, sperm, freezability

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 8. 4. 2016

Obhajoba závěrečné práce

• Vedoucí: doc. MVDr. Radko Rajmon, Ph.D.

Česká zemědělská univerzita v Praze

Fakulta agrobiologie, potravinových a přírodních zdrojů

Magisterský studijní program / obor:
Zootechnika / Živočišná produkce