Klonování genů a příprava expresních vektorů pro buněčné reprogramování mesenchymálních kmenových buněk tukové tkáně do oligodendrocytů

Bc. Petr Elsner

Diplomová práce

Gene cloning and construction of expression vectors for cellular reprogramming of adipose derived mesenchymal stem cells into oligodendrocytes

Anotace:

Poškození myelinu má za příčinu vznik a vývoj demyelinizačních onemocnění. Jedním z přístupů možné terapie je využití buněčného reprogramování pro náhradu poškozených nebo chybějících buněk tvořících myelin. Současné studie ukazují na to, že použití HMG transkripčního faktoru SOX10 v reprogramování somatických buněk může vytvořit oligodendrocytární prekurzory, které by se mohly použít v buněčné transplantaci. Tato diplomová práce se zaměřila na přípravu vektorů nesoucí modifikovaný transkripční faktor SOX10 transaktivační doménou VP16. Schopnost transaktivační domény zvyšovat aktivitu takto modifikovaných transkripčních faktorů byla potvrzena v duální luciferázové analýze. Tyto faktory také aktivují expresi Sox10 cílových genů jako je MPZ. Vektory obsahující kódující sekvenci SOX10-VP16 mohou být použity pro buněčné reprogramování somatických buněk, jako jsou např. mesenchymální kmenové buňky tukové tkáně do oligodendrocytů.

Abstract:

Myelin damage is the cause of the formation and development of demyelinating diseases. Use of the cell reprogramming to replace damaged or missing myelin-forming cells could become possible therapy. Recent studies indicate that the use of HMG transcription factor SOX10 in reprogramming somatic cells can create oligodendrocyte progenitor cells that could be used in cell transplantation. This thesis is focused on preparing a vector carrying the modified transcription factor SOX10 VP16 transactivation domain. The ability of the transactivating domain to increase the activity of the such modified transcription factors was confirmed in a dual luciferase analysis. These factors are also able to activate expression of Sox10 target gene MPZ. The vectors containing the sequence encoding SOX10-VP16 may be used for cellular reprogramming somatic cells such as e.g. adipose mesenchymal stem cells into oligodendrocytes

Klíčová slova

buněčné reprogramování, demyelinizace, oligodendrocyty, SOX10, VP16, lentivirový vektor, cellular reprogramming, demyelination, oligodendrocytes, lentiviral vector

Jazyk práce: čeština

Datum vytvoření / odevzdání či podání práce: 7. 1. 2015

Obhajoba závěrečné práce

• Obhajoba proběhla 3. 6. 2015
• Vedoucí: Dr. Vladimír Pekařík

Masarykova univerzita

Přírodovědecká fakulta

Magisterský studijní program / obor:
Experimentální biologie / Molekulární biologie a genetika